28898.煙色煙管菌誘變提高漆酶產(chǎn)量的研究

1、TheResearchofBjerkanderafumosamutagenizedtoimprovelaccaseproductionPENGYanchaoAthesissubmittedinpartialsatisfactionoftheRequirementsforthedegreeofMasterofScienceFermentationEngineeringinCentralSouthUniversityofForestryan

2、dTechnology498ShaoshanSouthRoad，TianxinDistrictChangshaHunan410004，PRCHINASupervisorProfessorCAOFuxiangMay2014摘要漆酶的作用底物廣泛，能應(yīng)用于紡織、食品、造紙、醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域，具有廣闊的應(yīng)用前景。真菌是目前認(rèn)為最有效的漆酶生產(chǎn)者，其中最主要的是擔(dān)子菌亞門的白腐真菌。但是野生菌漆酶活力較低，難以實現(xiàn)漆酶的工業(yè)化生產(chǎn)。本實驗通過紫

3、外、60CoY射線對煙色煙管菌(Bjerkanderafumosa5172)進(jìn)行復(fù)合誘變，旨在選育高產(chǎn)漆酶的菌株，為工業(yè)化生產(chǎn)提供一定理論依據(jù)。對煙色煙管菌進(jìn)行紫外誘變得到最佳誘變時間為180s正突變率為333％。篩選得到穩(wěn)定遺傳的菌株ZW7，漆酶活力為3202U／L，較原始菌株提高了278％，最高產(chǎn)酶時間較原始菌株提前了2天，為9天。選取ZW7作為優(yōu)勢菌株進(jìn)行60Co吖射線誘變得到最佳輻射劑量為500Gy，正突變率為417％。篩選得到

4、穩(wěn)定遺傳的菌株Co11，漆酶活力為3805U／L，比誘變株ZW7提高了189％，比原始菌株提高了518％，最高產(chǎn)酶時間與原始菌株一樣為11天。以誘變菌株Co11為研究對象，通過單因素實驗和響應(yīng)面實驗優(yōu)化得到最適培養(yǎng)基為(1L)葡萄糖159，麥麩109，尿素0179，cu2的添加濃度為075mmol／L，藜蘆醇的添加濃度為225mmol／L，KH2P0429，MgS04‘7H20159，維生素B11020mg，吐溫8019，微量元素70m

5、L。響應(yīng)面實驗表明碳氮比、Cu2濃度、藜蘆醇濃度對漆酶活力均有顯著影響，其中藜蘆醇濃度的影響最顯著。通過單因素實驗和正交實驗優(yōu)化發(fā)酵外部條件得到溫度為28。C、接種量為5個直徑約為5mm的菌塊、pH為55、裝液量為100mL和轉(zhuǎn)速為120r／min時，漆酶活力達(dá)到最大。正交實驗表明各因素對漆酶活力的影響大小依次為裝液量、pH、溫度和接種量。在此基礎(chǔ)上發(fā)酵得到的漆酶活力為8281U／L，與優(yōu)化前相比，漆酶活力提高了1176％。在優(yōu)化的發(fā)酵