甜菜當(dāng)年抽苔差異表達(dá)基因的克隆及特性研究.pdf

1、分析引起甜菜當(dāng)年抽苔的原因,國(guó)內(nèi)外研究認(rèn)為遺傳與環(huán)境因素都能影響甜菜抽苔.可分為內(nèi)因和外因.具體地說(shuō),內(nèi)因是由控制甜菜一年或二年生習(xí)性的基因決定的,而外因則是生態(tài)條件即當(dāng)年能滿(mǎn)足其生殖生長(zhǎng)的環(huán)境條件,那么就會(huì)出現(xiàn)當(dāng)年抽苔的現(xiàn)象,該條件主要是春化和光周期:即低溫和長(zhǎng)日照.此外營(yíng)養(yǎng)條件、激素水平等也影響甜菜當(dāng)年抽苔.無(wú)論是光周期、赤霉素還是低溫這些環(huán)境條件都是外因,都要通過(guò)內(nèi)因,也就是必須通過(guò)對(duì)基因的作用才能起作用.因此,要想研究二年生甜菜

2、當(dāng)年抽苔的機(jī)理,就必須分離克隆抽苔基因,弄清基因結(jié)構(gòu),表達(dá)調(diào)控等,這樣才能從分子水平解釋抽苔機(jī)理.該試驗(yàn)研究低溫誘導(dǎo)甜菜抽苔的差異表達(dá)基因,探討二年生甜菜當(dāng)年抽苔的分子機(jī)理.主要研究結(jié)果如下:1.試驗(yàn)在Conviron E15型人工氣候室人工控制溫度、日長(zhǎng)進(jìn)行.采用馬鳳鳴等試驗(yàn)條件(長(zhǎng)日照16h、4 ℃、72d,抽苔率100％)誘導(dǎo)"甜研材料"幼苗抽苔;采集不同時(shí)期和各處理的莖尖,提取總RNA,置換合成雙鏈cDNA.合成3對(duì)接頭引物,用

3、代表性差示分析分離抽苔差異表達(dá)基因片段.將分離到的差異片段克隆,測(cè)序,獲得323bp差異片段DP3序列.GenBank中的注冊(cè)號(hào)為AY326073.2.根據(jù)cDNA-RDA獲得323bp差異片段DP3序列,設(shè)計(jì)引物.3.根據(jù)RACE雙拼接結(jié)果設(shè)計(jì)一對(duì)引物,以Ty7的cDNA為模極,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增回收的片段命名為T(mén)y7Br600.將其克隆,測(cè)序,獲得609bp差異片段序列.4.分別以Ty7和TA33的DNA為模板,進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)

4、增回收的片段分別命名為T(mén)y7Br900和TA33Br600.將其克隆,測(cè)序,分別獲得609bp和855bp基因片段序列.5.綜合DNAMAN、PHD、SOSUI軟件、GLOBE等幾種軟件預(yù)測(cè)結(jié)果,可以推測(cè)Ty7Br600基因編碼部分的蛋白可能是一種分子量約為15KD,等電點(diǎn)pI為5.85,具有緊湊的球狀膜蛋白(compact,globular membrane protein).6.對(duì)Ty7Br600基因進(jìn)行RT-PCR分析,7.構(gòu)建原