草菇低溫誘導(dǎo)基因的分離與鑒定.pdf

1、革菇起源于中國,迄今已有300多年的栽培歷史.草菇是熱帶和亞熱帶的一種主要栽培食用真菌,如同大多數(shù)熱帶和亞熱帶作物一樣,零上低溫條件(10℃以下)會造成草菇菌絲生理損傷而發(fā)生菌絲自溶導(dǎo)致草菇的死亡.這給草菇的生產(chǎn)帶來了極大的困難,也制約了草菇生產(chǎn)在中國甚至世界上的發(fā)展,本文從草菇低溫誘導(dǎo)基因方面著手采用mRNA差別篩選技術(shù)比較新鮮和在低溫處理草菇的基因表達,在選用的32個隨機引物進行PCR擴增中,有19個引物擴增出mRNA的差異條帶,從

2、瓊脂糖凝膠中直接切割特異條帶,經(jīng)PCR再次擴張放大,瓊脂糖凝膠電泳純化,共分離并純化63個mRNA低溫特異片段.采用PCR摻入法合成地高辛標(biāo)記的cDNA探針,根據(jù)cDNA-DNA雜交所顯示的結(jié)果,證明mRNA顯示技術(shù)所分離的基因片段中有12具有溫特異性.將此12個片段標(biāo)記為地高辛探針,與草菇基因組DNA片段進行Southern雜交,雜交的結(jié)果表明經(jīng)低溫誘導(dǎo)產(chǎn)生的冷激基因在草菇基因組中為低拷貝數(shù)存在.為獲得草菇低溫誘導(dǎo)基因的全長序列,本研