大鼠肌肉衛(wèi)星細(xì)胞的分離培養(yǎng)鑒定與誘導(dǎo)分化.pdf

1、骨骼肌肌肉控制著脊椎動物的精確的運動。成體骨骼肌的組成單元是肌纖維。肌纖維是由一群處于有絲分裂間期的成肌細(xì)胞組成的合胞體。而未分化的肌肉衛(wèi)星細(xì)胞參與了合胞體的修復(fù)和維持。
　　 肌肉衛(wèi)星細(xì)胞是未分化的單核肌源性細(xì)胞群落，在哺乳動物、爬行動物、鳥類、兩棲動物的骨骼肌內(nèi)都能發(fā)現(xiàn)。1961年在蛙的肌肉中首先發(fā)現(xiàn)了衛(wèi)星細(xì)胞的存在。電鏡觀察提示衛(wèi)星細(xì)胞位于骨骼肌纖維的肌細(xì)胞膜與基底膜之間，其核較大、胞漿少，細(xì)胞器數(shù)量少。這些特征說明衛(wèi)星細(xì)

2、胞處于有絲分裂靜止期，其轉(zhuǎn)錄活性低于肌纖維。
　　 由于能夠從病人骨骼肌中獲得并在體外大量擴(kuò)增，肌肉衛(wèi)星細(xì)胞可以作為細(xì)胞移植的資源，并且已經(jīng)應(yīng)用于骨骼肌和心肌的重建。盡管發(fā)現(xiàn)衛(wèi)星細(xì)胞的存在已經(jīng)有50多年的歷史了，但分離鑒定肌肉衛(wèi)星細(xì)胞的方法仍然具有不穩(wěn)定性。
　　 本研究使用兩步酶消化和差速貼壁相結(jié)合的方法分離大鼠肌肉衛(wèi)星細(xì)胞。Desmin免疫細(xì)胞化學(xué)染色、Myf5及Myod1的RT-PCR法證明了所分離的細(xì)胞是肌肉衛(wèi)星

3、細(xì)胞。成肌和成脂誘導(dǎo)試驗證明了所分離的肌肉衛(wèi)星細(xì)胞具有多分化潛能。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.通過兩步酶消化和差速貼壁相結(jié)合的方法分離得到了肌肉細(xì)胞系。Desmin免疫細(xì)胞化學(xué)染色、Myf5及Myod1的RT-PCR法證明了所分離的細(xì)胞是肌肉衛(wèi)星細(xì)胞。
　　 2.分離得到的肌肉衛(wèi)星細(xì)胞能夠向成肌細(xì)胞和脂肪細(xì)胞分化的潛能，具有一定的多能性。
　　 3.DCA處理促進(jìn)了肌肉衛(wèi)星細(xì)胞的增殖并激活了WNT/beta-C