拉米夫定對(duì)禽白血病病毒的體內(nèi)外抑制效應(yīng)及其應(yīng)用.pdf

1、禽白血?。ˋvian leukemia，AL）是由禽白血病病毒（Avian leukosis virus，ALV）引起的禽類多種良性和惡性腫瘤性疾病，臨床上多以免疫抑制、生長(zhǎng)抑制和多器官組織出現(xiàn)腫瘤等為主要特征，其傳播主要通過(guò)垂直傳播。此外，由于一些弱毒疫苗中污染了ALV也給規(guī)模化養(yǎng)雞業(yè)和家禽疫苗產(chǎn)業(yè)帶來(lái)了巨大的危害。目前尚無(wú)有效的商品化疫苗用于ALV的預(yù)防。ALV與人獲得性免疫缺陷綜合癥病毒（Human Immunodeficienc

2、y Virus，HIV）同屬于反轉(zhuǎn)錄病毒，鑒于通過(guò)多種藥物及其組合已經(jīng)較好的控制了HIV，我們有興趣知道類似的藥物是否可以輔助降低外源性ALV的感染率或用于去除疫苗中ALV污染。本研究觀察了逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑類藥物拉米夫定（Lamivudine，LAM）對(duì)ALV-J在體外和體內(nèi)的抑制作用并成功在模擬實(shí)驗(yàn)中將新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）弱毒疫苗中ALV-A污染去除。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴通過(guò)

3、在不同藥物濃度培養(yǎng)液中細(xì)胞的連續(xù)傳代和CCK-8細(xì)胞毒性測(cè)定兩種方法確定了在培養(yǎng)液中添加不超5ug/ml的LAM對(duì)于DF-1細(xì)胞復(fù)制沒(méi)有影響。為了解不同濃度LAM對(duì)ALV-J在體外的抑制作用，實(shí)驗(yàn)將J亞群rNX0101株接種到DF-1細(xì)胞上，然后在不同孔中分別使用20ug/ml，10ug/ml，5ug/ml，1ug/ml LAM的維持液培養(yǎng)以測(cè)定病毒復(fù)制動(dòng)態(tài)。結(jié)果顯示，5ug/ml的安全用藥范圍內(nèi)，其抗病毒作用與其濃度呈正相關(guān)，即隨著藥

4、物濃度的增加，rNX0101的復(fù)制受到抑制作用隨之增強(qiáng)。按照類似操作觀察了LAM對(duì)ALV-A也有明顯的抑制作用。將人為污染ALV-A的NDV疫苗毒種經(jīng)過(guò)5 ug/ml的LAM連續(xù)干預(yù)2代后，經(jīng)接種SPF雞、病毒分離以及核酸檢測(cè)確認(rèn)成功將其中人為污染的ALV去除。⑵經(jīng)細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)和對(duì)病毒的抑制作用實(shí)驗(yàn)確定5 ug/ml為ALV復(fù)制被顯著抑制但可以繼續(xù)復(fù)制的藥物濃度用于構(gòu)建藥物選擇壓，在6孔細(xì)胞板中分別設(shè)置用藥組和空白組。連傳60代后，將原

5、始毒株、第六十代用藥組病毒及第六十代未用藥組病毒進(jìn)行準(zhǔn)確定量，以相同病毒量接種細(xì)胞，分別觀察同等接種劑量在添加0ug/ml和5 ug/ml的LAM后不同毒株復(fù)制曲線，結(jié)果顯示5ug/ml藥物濃度下，對(duì)原始毒株抑制作用遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于對(duì)藥物選擇壓下的傳代毒株，證實(shí)出現(xiàn)了對(duì)LAM產(chǎn)生耐藥性的ALV-J毒株。⑶給不同組別的雞分別使用不同劑量的LAM后通過(guò)定期稱重并檢測(cè)針對(duì)NDV和AIV-H9的抗體評(píng)估不同劑量LAM對(duì)雞體重和免疫功能的影響，結(jié)果顯示分

6、別使用1mg，4mg和6mg的藥物組其體重以及AIV-H9和NDV抗體與未空白對(duì)照組相比差異均不顯著。將不同組別的雞人工攻毒后分別使用不同劑量的藥物連續(xù)用藥一周，從第一周起每只雞采集抗凝血檢測(cè)各組病毒血癥陽(yáng)性率。結(jié)果顯示，未使用LAM的ALV-J感染組在感染后21d時(shí)有85.00％轉(zhuǎn)為病毒血癥陽(yáng)性，并且直到105d時(shí)還維持在一個(gè)較高的病毒血癥水平（65.00%），而使用4mgLAM的感染組在63d時(shí)即轉(zhuǎn)為病毒血癥陰性。使用1mg LAM