泰山松花粉多糖抗J亞型禽白血病病毒的作用研究.pdf

1、禽白血?。ˋvian Leucosis，AL）是由禽白血病病毒（Avian Leukosis Virus，ALV）和禽肉瘤病毒（Avian Sarcoma Virus，ASV）群中的病毒感染引起的多種腫瘤性疾病的統(tǒng)稱。根據(jù)病毒與宿主特異性相關(guān)的gp85蛋白抗原性的差異以及交叉中和試驗(yàn)等，將禽白血病病毒分為A、B、C、D、E和J等亞群，其中商品雞群中以J亞型（ALV-J）的致病性和感染性最強(qiáng)。該病主要通過先天感染和水平接觸感染傳播，在蛋雞

2、、肉雞以及我國地方品系雞群中都有發(fā)生，造成雞群免疫抑制、腫瘤性死亡，繼發(fā)感染等危害，給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。由于ALV-J基因序列的復(fù)雜性及其抗原變異性，到目前為止還缺乏有效的疫苗和藥物，只能通過種群凈化控制該病。但由于養(yǎng)殖管理不規(guī)范，凈化不徹底等原因，該病在養(yǎng)禽地區(qū)的傳播依舊普遍，特別是在發(fā)展中國家。因此，亟需探索新的方法控制ALV的感染和散播。泰山松花粉多糖（Taishan pinus pollen polysaccharide，

3、TPPPS）是一種天然植物大分子，本實(shí)驗(yàn)室之前的研究表明TPPPS具有很好的免疫增強(qiáng)和抗病毒活性，并可以抑制B亞群禽白血病病毒的體外復(fù)制。然而，TPPPS是否可以抑制J亞型禽白血病病毒的感染，目前尚不清楚。
　　本研究的重點(diǎn)是探討TPPPS對(duì)ALV-J感染的抑制作用及其作用機(jī)制。首先檢測了泰山松花粉多糖體外抑制ALV-J的活性和能力，然后通過透射電鏡進(jìn)一步觀察了TPPPS與ALV-J粒子之間的相互作用來揭示TPPPS干擾病毒吸附的

4、可能機(jī)制；其次，試驗(yàn)中人工構(gòu)建了一個(gè)先天感染ALV-J雛雞模型來檢測TPPPS的體內(nèi)抗病毒效果；最后，試驗(yàn)評(píng)估了TPPPS對(duì)急性致瘤性ALV-J感染的作用效果。
　　本研究分以下三部分內(nèi)容：
　　1.TPPPS體外抗ALV-J的活性及其機(jī)制分析
　　1.1、TPPPS體外抗病毒活性
　　為了驗(yàn)證TPPPS的體外抗ALV-J特性，檢測了TPPPS對(duì)ALV-J在DF-1細(xì)胞上的復(fù)制能力的影響，且比較了TPPPS作用在

5、病毒感染不同時(shí)期時(shí)的作用效果。結(jié)果顯示，TPPPS可以明顯抑制ALV-J的體外增殖，并且在病毒感染吸附期的作用效果最佳。
　　1.2、透射電鏡（TEM）試驗(yàn)
　　為了探究TPPPS干擾病毒吸附的作用方式，用透射電鏡觀察了TPPPS對(duì)ALV-J吸附DF-1細(xì)胞的影響。結(jié)果顯示TPPPS能明顯減少DF-1細(xì)胞膜表面處于膜融合狀態(tài)及進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的病毒粒子數(shù)量。說明TPPPS減少了病毒對(duì)細(xì)胞的吸附和感染。
　　隨后又通過負(fù)染觀

6、察來TPPPS與ALV-J粒子的相互作用。發(fā)現(xiàn)TPPPS與ALV-J粒子混合后，會(huì)明顯影響ALV-J粒子的形態(tài)和分布，病毒粒子呈現(xiàn)不規(guī)則形態(tài)，并且發(fā)生聚集。這證明TPPPS與ALV-J病毒粒子確實(shí)發(fā)生了直接作用。
　　2.TPPPS對(duì)先天感染ALV-J雞的免疫調(diào)理及抗病毒作用研究
　　2.1、ALV-J先天感染雛雞模型的建立
　　ALV-J的主要傳播方式為通過種雞經(jīng)雞蛋（胚）向下一代垂直傳播，引起出殼后的雛雞免疫抑制，

7、呈現(xiàn)持久的病毒血癥，生產(chǎn)性能下降。本研究選用7胚齡雞胚卵黃囊接種不同濃度（101、102、103、104 TCID50）的ALV-J，比較其孵化率。選取保證所有雛雞孵化的最高病毒劑量（103 TCID50）作為構(gòu)建先天感染雛雞模型的病毒接種劑量。
　　2.2、TPPPS對(duì)先天感染ALV-J雞的體內(nèi)抗病毒作用研究
　　研究表明TPPPS對(duì)ALV-B有很好的抗病毒活性。本研究通過給予先天感染ALV-J雛雞TPPPS作用，分析多糖

8、對(duì)ALV-J的體內(nèi)抗病毒作用。結(jié)果顯示，TPPPS作用后的雛雞泄殖腔排毒量明顯下降，且排毒的開始時(shí)間延遲了接近一個(gè)周。這對(duì)減輕ALV-J的水平傳播具有重大的意義。同時(shí)，TPPPS還降低了免疫器官的帶毒量，減輕了病毒對(duì)免疫器官的損傷。這表明TPPPS在先天感染ALV-J雞體內(nèi)同樣具有顯著的抗病毒活性。
　　2.3、TPPPS對(duì)先天感染ALV-J雞的免疫調(diào)理作用研究
　　試驗(yàn)證明，TPPPS可以增強(qiáng)機(jī)體免疫力，對(duì)環(huán)磷酰胺導(dǎo)致的免

9、疫抑制小鼠有免疫恢復(fù)作用。ALV-J的先天感染引起雞體明顯的免疫抑制，而TPPPS調(diào)理后雞體的免疫狀況明顯改善，具體表現(xiàn)為體重和免疫器官指數(shù)，外周血淋巴細(xì)胞增殖率，淋巴細(xì)胞數(shù)量，細(xì)胞因子的分泌和ND抗體的水平等各項(xiàng)免疫指標(biāo)均有明顯的提高。說明TPPPS可以作為一種免疫增強(qiáng)劑，以減輕ALV-J先天感染造成的免疫抑制現(xiàn)象。
　　3.TPPPS對(duì)感染急性致瘤性ALV-J雞的抗腫瘤作用研究
　　Fu-J病毒是一種ALV-J相關(guān)的急性