銀杏外種皮多糖、黃芩苷抗禽白血病病毒復(fù)制作用的研究.pdf

1、研究背景
　　禽白血病病毒是禽類的致癌性逆轉(zhuǎn)錄病毒，能夠引起臨床腫瘤，目前沒有有效藥物治療和預(yù)防。國內(nèi)外研發(fā)的抗病毒藥物雖然多，但是其毒副作用大，病毒易產(chǎn)生耐藥性，而且抗病毒的種類也有限。與西藥相比，中藥具有耐藥性低，毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)，還可以抑制病毒復(fù)制和調(diào)節(jié)免疫功能等特點(diǎn)。根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報道，銀杏外種皮多糖和黃芩苷具有廣譜的抗病毒作用，黃芩苷可以抑制屬于逆轉(zhuǎn)錄病毒的HIV病毒的復(fù)制?；谥暗膱蟮辣狙芯渴走x這兩種中藥作為抗禽白血病

2、毒的研究。
　　研究目的
　　本研究是在前人研究中藥抗病毒活性的基礎(chǔ)上，主要利用體外細(xì)胞培養(yǎng)法，研究兩種常見抗病毒中藥，銀杏外種皮多糖和黃芩苷對J亞群禽白血病病毒在DF-1細(xì)胞中復(fù)制與增殖的影響，并進(jìn)一步探討中藥調(diào)節(jié)細(xì)胞抗病毒的具體機(jī)制。
　　研究方法
　　1、采用細(xì)胞毒性檢測方法對銀杏外種皮多糖和黃芩苷在DF-1細(xì)胞上的細(xì)胞毒性進(jìn)行測定。利用實(shí)時熒光定量PCR方法初步鑒定這兩種藥物的抗病毒作用。
　　2、

3、體外實(shí)驗(yàn)采用實(shí)時熒光定量PCR、Western blot、TCID50方法，在感染ALV-J病毒的DF-1細(xì)胞中研究銀杏外種皮多糖和黃芩苷抗病毒作用及其機(jī)制。
　　3、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)采用感染ALV-J病毒130日齡家禽作為實(shí)驗(yàn)動物模型，分離外周血淋巴細(xì)胞，體外進(jìn)行黃芩苷藥物作用，16h后通過流式細(xì)胞儀分析不同濃度黃芩苷誘導(dǎo)感染ALV-J淋巴細(xì)胞的凋亡比例，初步鑒定黃芩苷促病毒感染細(xì)胞的凋亡作用。
　　研究結(jié)果
　　1、測定銀

4、杏外種皮多糖在DF-1細(xì)胞中當(dāng)藥物濃度在200μg/mL時仍然沒有細(xì)胞毒性，黃芩苷無細(xì)胞毒性劑量為20μg/mL。熒光定量PCR結(jié)果初步鑒定銀杏外種皮多糖和黃芩苷可以顯著下調(diào)ALV-J病毒gp37基因在DF-1細(xì)胞中的表達(dá)。
　　2、分別在基因和蛋白水平以及病毒增殖實(shí)驗(yàn)中證明銀杏外種皮多糖可以有效抑制ALV-J的復(fù)制作用。銀杏外種皮多糖有效抑制ALV-J病毒復(fù)制作用，主要在預(yù)處理階段發(fā)揮抑制病毒的功效。同時銀杏外種皮多糖還顯著下調(diào)

5、細(xì)胞ISG12-2、TNF-α和IL-1β的表達(dá)。這種現(xiàn)象是否與銀杏外種皮多糖抑制病毒復(fù)制作用直接相關(guān)，還有待進(jìn)一步研究。
　　3、分別在基因和蛋白水平以及病毒增殖實(shí)驗(yàn)中證明黃芩苷可以有效抑制ALV-J的復(fù)制作用，并呈現(xiàn)出劑量和時間依賴性。黃芩苷促使細(xì)胞ISG12-2、TNF-α和IL-1β的表達(dá)顯著下調(diào)，這種現(xiàn)象是否與黃芩苷抑制病毒復(fù)制作用直接相關(guān)，還有待進(jìn)一步研究。初步證明黃芩苷可以誘導(dǎo)體外分離培養(yǎng)的ALV-J病毒感染的動物外

6、周血淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡，并且凋亡比例呈現(xiàn)藥物劑量依賴性。
　　結(jié)論
　　銀杏外種皮多糖和黃芩苷在體外DF-1細(xì)胞中均具有明顯的抗J亞群禽白血病病毒復(fù)制作用。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)藥物對病毒復(fù)制影響的同時還下調(diào)病毒感染細(xì)胞中ISG12-2、IL-1β、TNF-α細(xì)胞因子表達(dá)，那么細(xì)胞因子的下調(diào)是否與抗病毒作用具有直接關(guān)聯(lián)，還有待進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證明。此外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明黃芩苷可以誘導(dǎo)ALV-J病毒感染的外周血淋巴細(xì)胞發(fā)生凋亡，其具體的促凋亡機(jī)制有待進(jìn)