J亞型禽白血病病毒抗體檢測(cè)方法的建立及LTR體外啟動(dòng)活性分析.pdf

1、J亞群禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus Subgroup J,ALV-J)自上個(gè)世紀(jì)發(fā)現(xiàn)以來,以垂直和水平兩種傳播形式在世界各國(guó)肉種雞及商品肉用型雞群中廣泛流行,以誘發(fā)腫瘤、引起肉種雞死亡和消瘦為主要特征,同時(shí)還能導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生免疫抑制,給養(yǎng)禽業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來,該病在我國(guó)養(yǎng)雞業(yè)中呈現(xiàn)流行趨勢(shì),其致瘤宿主譜系己擴(kuò)展至不易發(fā)生腫瘤的商品蛋雞。鑒于目前尚無有效的藥物或疫苗可供使用,通過淘汰ALV-J抗體陽性雞群

2、,減少垂直傳播是當(dāng)前凈化雞群感染禽白血病的唯一手段。因此,建立ALV-J抗體的特異性檢測(cè)方法,對(duì)防制該病流行、開展種群凈化具有重要意義。本論文即利用原核表達(dá)系統(tǒng)高效表達(dá)了ALV-J的囊膜糖蛋白基因,并以純化蛋白為抗原建立了檢測(cè)ALV-J抗體的間接ELISA方法。
　　 首先,根據(jù)ALV-J原型株HPRS103基因序列設(shè)計(jì)了一對(duì)引物,特異性擴(kuò)增出囊膜糖蛋白基因(gp85),并構(gòu)建了原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET-gp85,轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL

3、21(DE3),經(jīng)IPTG誘導(dǎo)獲得高效表達(dá),分子量約為37kD。蛋白免疫電泳檢測(cè)(Western Blot)結(jié)果表明,表達(dá)蛋白具有良好的免疫原性。然后,本研究以純化后的GP85蛋白作為抗原,初步建立了檢測(cè)ALV-J抗體的間接ELISA檢測(cè)方法,并對(duì)部分雞場(chǎng)的ALV-J疑似血清樣本進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明,上海某種雞場(chǎng)的血清陽性率為100％、安徽某種雞場(chǎng)血清陽性率為85.7％(6／7)、安徽某青殼蛋雞場(chǎng)血清陽性檢出率為53.8％(7／13),

4、提示ALV-J感染在我國(guó)部分規(guī)模養(yǎng)雞場(chǎng)十分嚴(yán)重。
　　 為了探討ALV-J在雞群中垂直傳播的分子機(jī)制,為臨床防制ALV-J感染提供理論依據(jù),本論文還對(duì)ALV-J基因組的長(zhǎng)末端重復(fù)序列(LTR)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能進(jìn)行了研究。首先,將LTR基因插入含有螢光素酶報(bào)告基因的pGL3-Basic載體中,獲得pGL3-LTR重組質(zhì)粒；此外,還構(gòu)建了缺失LTR不同區(qū)段(U5、U3和R區(qū))的重組質(zhì)粒。然后轉(zhuǎn)染DF1細(xì)胞,通過檢測(cè)螢光素酶的表達(dá),研究