禽白血病病毒通過(guò)弱毒疫苗污染途徑對(duì)雞免疫機(jī)能及生產(chǎn)性能的影響.pdf

1、禽白血病病毒（Avian leukosis virus, ALV）是引起禽類發(fā)生腫瘤性疾病的一種重要病原，該病毒可引起禽的多種具有傳染性的良性腫瘤和惡性腫瘤，同時(shí)能導(dǎo)致感染機(jī)體發(fā)生嚴(yán)重的細(xì)胞和體液免疫抑制以及生長(zhǎng)抑制，進(jìn)而易與其他病原并發(fā)或混合感染，給養(yǎng)禽業(yè)帶來(lái)重大損失。為了防止ALV的流行，很多國(guó)家已實(shí)施了非常嚴(yán)格的凈化措施來(lái)控制ALV。但由于ALV傳播方式的廣泛性，使得ALV感染在我國(guó)及其它國(guó)家仍然普遍存在。除垂直傳播外，使用了被A

2、LV污染的弱毒疫苗被認(rèn)為是ALV感染的另一重要途徑，不管是在中國(guó)還是其他國(guó)家都曾多次報(bào)道過(guò)ALV在弱毒疫苗中的污染。使用了被ALV污染的弱毒疫苗會(huì)給已經(jīng)完成ALV凈化的養(yǎng)殖企業(yè)帶來(lái)巨大損失。因此我們?cè)O(shè)計(jì)了人工模擬試驗(yàn)，探究使用不同劑量ALV污染疫苗對(duì)海蘭褐雞的影響，并對(duì)ALV在弱毒疫苗中的污染進(jìn)行了不同檢測(cè)方法的比較。
　　1．弱毒疫苗中禽白血病病毒污染對(duì)海蘭褐雞免疫機(jī)能及生產(chǎn)性能的影響
　　為了探究使用污染ALV的弱毒疫苗

3、后對(duì)雞的生產(chǎn)性能和免疫機(jī)能的影響，將不同劑量ALV-A摻入市售合格的馬立克氏病疫苗，接種到海蘭褐雞上；七日齡時(shí)分別接種ALV-A、ALV-J，并同時(shí)免疫NDV和AIV-H9滅活疫苗。結(jié)果表明，使用每羽份污染10 TCID50 ALV和50 TCID50 ALV兩種劑量的MDV疫苗后均造成了海蘭褐雞體重的下降，與使用未污染疫苗組相比差異顯著。其中使用污染50 TCID50 ALV的MDV疫苗組明顯低于使用污染10 TCID50 ALV的M

4、DV疫苗組。并且使用兩種ALV污染劑量的疫苗后MDV核酸含量與使用未污染組相比顯著降低。其中使用污染50 TCID50 ALV的MDV疫苗組顯著低于使用污染10 TCID50 ALV的MDV疫苗組。同時(shí)使用污染兩種劑量ALV的疫苗后NDV和AIV-H9的抗體滴度與使用無(wú)污染疫苗組相比顯著下降。其中使用污染50 TCID50 ALV的MDV疫苗組明顯低于使用污染10 TCID50 ALV的MDV疫苗組。并且，七日齡再次感染ALV后，生長(zhǎng)及

5、免疫的抑制作用更加明顯。其中，再次感染ALV-J的組生長(zhǎng)及免疫的抑制作用比再感染ALV-A的組更加明顯。本研究通過(guò)展示弱毒疫苗中ALV污染對(duì)海蘭褐雞生產(chǎn)性能及免疫機(jī)能的影響，提示我們?cè)谑褂萌醵疽呙鐣r(shí)要嚴(yán)防外源病毒的污染。
　　2．內(nèi)源性禽白血病病毒基因?qū)Ψ肿由飳W(xué)方法檢測(cè)弱毒疫苗中禽白血病病毒污染的干擾及鑒別
　　使用了污染有禽白血病病毒特別是A亞群ALV的弱毒疫苗是ALV感染途徑之一，而應(yīng)用PCR檢測(cè)弱毒疫苗中ALV污染時(shí)

6、通常會(huì)受到雞染色體上內(nèi)源性ALV基因的干擾。目前國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)規(guī)程是將疫苗經(jīng)不同預(yù)處理后接種至雞胚成纖維細(xì)胞后盲傳并測(cè)定其細(xì)胞上清中p27抗原，但是很多企業(yè)不了解這一情況通過(guò)使用p27的PCR檢測(cè)方法檢測(cè)疫苗污染并引起很多糾紛，為了說(shuō)明這一方法的不合理性，本研究針對(duì)ALV保守的群特異性抗原p27基因設(shè)計(jì)合成了兩對(duì)引物，應(yīng)用兩對(duì)引物對(duì)不同來(lái)源SPF雞胚及其制備的雞胚成纖維細(xì)胞（CEF）進(jìn)行PCR檢測(cè)時(shí)均為陽(yáng)性，但雞胚的蛋清和細(xì)胞培養(yǎng)上清經(jīng)

7、ALV-p27抗原ELISA檢測(cè)均為陰性；應(yīng)用上述引物對(duì)市售合格的雞馬立克氏病毒（MDV）、雞傳染性法氏囊病毒（IBDV）和禽痘病毒（FPV）等活疫苗進(jìn)行PCR檢測(cè)時(shí)均為陽(yáng)性，但應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)室研制的雞外源性禽白血病病毒特異性核酸探針交叉斑點(diǎn)雜交檢測(cè)試劑盒卻均為陰性，并且應(yīng)用核酸斑點(diǎn)雜交可檢測(cè)到10 TCID50/1000羽份的人為添加污染，顯示了良好的特異性和靈敏度。本研究表明在某些SPF雞胚及其制品中內(nèi)源性ALV基因?qū)CR檢測(cè)的干擾，