TLR2和TLR6在雞毒支原體感染的作用機(jī)理研究.pdf

1、雞毒支原體（Mycoplasma gallisepticum，MG）是雞慢性呼吸道疾病(Chronicrespiratory disease，CRD)及火雞傳染性竇炎的病原。CRD在世界各地的雞群中廣泛分布，給養(yǎng)禽業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。Toll樣受體（Toll like receptor，TLRs）是一種模式識(shí)別受體，能夠特異地識(shí)別病原微生物的保守分子，通過偶聯(lián)信號傳導(dǎo)途徑，激活天然免疫細(xì)胞，引起一系列的炎癥反應(yīng)。TLRs在介導(dǎo)天然免

2、疫和獲得性免疫中起著關(guān)鍵的作用。
　　 研究表明，動(dòng)物對侵入的病原微生物的識(shí)別是通過天然免疫系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)的，存在于細(xì)胞表面的TLRs發(fā)揮著重要作用。模式識(shí)別系統(tǒng)可使動(dòng)物檢測到侵入的病原微生物，并且啟動(dòng)抗微生物的機(jī)制。隨著對哺乳動(dòng)物的TLRs配體、種類和生物學(xué)功能等的深入了解，為免疫受體與病原體相互作用的機(jī)理研究提供了新思路。近年來，禽類TLRs在寄生蟲病及病毒感染方面的研究取得了一定的進(jìn)展。目前MG的感染機(jī)制尚未闡明，禽類TLRs及

3、信號通路對MG感染的作用未見報(bào)道。因此本試驗(yàn)以分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)為基礎(chǔ)，通過細(xì)胞水平及動(dòng)物水平研究TLR2和TLR6介導(dǎo)的NF-κB信號通路對MG感染的作用，為闡明MG的分子致病機(jī)制及抵抗或治療雞的CRD提供科學(xué)依據(jù)。
　　 本研究主要使用Q-PCR方法檢測DF-1細(xì)胞經(jīng)不同處理（TLR2基因超表達(dá)、TLR6基因超表達(dá)、TLR2和TLR6基因共同超表達(dá)以及TLR6基因沉默）后感染MG及11d雞胚感染MG后不同時(shí)間(12d、1

4、3d、15d、19d) TLR2、TLR6以及NF-κB信號通路中相關(guān)基因(MyD88, NF-κB，TNFα，IL2和IL6)的mRNA表達(dá)情況。結(jié)果表明:
　　 1.TLR2超表達(dá)和TLR6干擾處理DF-1細(xì)胞后對NF-κB基因以及下游炎癥因子均無顯著影響;TLR6超表達(dá)組以及TLR2，TLR6共表達(dá)組中TNFα無顯著變化，NF-κB信號通路中的相關(guān)基因MyD88，NF-κB，IL2及IL6顯著上調(diào)(p＜0.05)。

5、　　 2.MG感染DF-1細(xì)胞與正常DF-1細(xì)胞相比，TLR6，MyD88，NF-κB，TNFα和IL6基因表達(dá)顯著上調(diào)(P＜0.05)，IL2和TLR2表達(dá)無明顯變化。
　　 3.各處理組細(xì)胞感染MG后發(fā)現(xiàn)，TLR6干擾組除TNFα極顯著上調(diào)(P＜0.01)外，其它基因無顯著差異;其余各組NF-κB信號通路中的相關(guān)基因MyD88，NF-κB，TNFα，IL2和IL6均極顯著上調(diào)(P＜0.01)。
　　 4.MG感染1

6、1d雞胚，12d雞胚肺組織中NF-κB信號通路各基因表達(dá)無顯著差異;13d雞胚肺組織中IL2和IL6基因無顯著差異;TLR2和NF-κB信號通路各基因表達(dá)量均顯著上調(diào)(p＜0.05);15d雞胚氣管和肺組織中NF-κB信號通路各基因表達(dá)顯著上調(diào)(p＜0.05);19d雞胚氣管和肺組織中TLR6極顯著上調(diào)(P＜0.01)，TLR2及NF-κB信號通路中相關(guān)基因表達(dá)量顯著下調(diào)(P＜0.05)。
　　 本研究結(jié)果顯示MG感染DF-1細(xì)