解脲支原體體外抑制HeLa細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)凋亡及TLR2表達(dá)相關(guān)研究.pdf

1、目的：
　　 本課題以Hela細(xì)胞作為宮頸柱狀上皮的細(xì)胞模型進(jìn)行研究，用不同濃度UU1干預(yù)后，觀察細(xì)胞抑制率及凋亡情況，檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TLR2蛋白表達(dá)情況，初步分析UU1對(duì)HeLa細(xì)胞的生長(zhǎng)和凋亡的影響及UU1對(duì)HeLa細(xì)胞TLR2表達(dá)的影響，探討TLR2信號(hào)途徑與UU1致病關(guān)系。
　　 方法：
　　 1、培養(yǎng)HeLa細(xì)胞，UU1干預(yù)48h后，光學(xué)顯微鏡下觀察干預(yù)組與對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化;Hoechst熒光染色后，熒

2、光顯微鏡下觀察UU1干預(yù)細(xì)胞48h后細(xì)胞凋亡的情況。
　　 2、培養(yǎng)HeLa細(xì)胞，不同濃度UU1分別干預(yù)24h、48h、72h后，MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞抑制情況，計(jì)算抑制率的差別，同時(shí)設(shè)置對(duì)照組和調(diào)零組，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。
　　 3、培養(yǎng)HeLa細(xì)胞，UU1干預(yù)48h后，用異硫氫酸熒光素(FITC)標(biāo)記TLR2抗體對(duì)Hela細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色，觀察UU1干預(yù)組與非干預(yù)組細(xì)胞表面TLR2的表達(dá)情況;不同濃度的UU1干預(yù)HeLa

3、細(xì)胞24h、48h，Western blotting定量細(xì)胞中TLR2蛋白表達(dá)差別。
　　 結(jié)果：
　　 1、Hela細(xì)胞加入U(xiǎn)U1作用48小時(shí)后，光鏡下細(xì)胞出現(xiàn)凋亡的特征性改變:細(xì)胞皺縮變形，細(xì)胞質(zhì)致密濃縮，核仁消失，染色質(zhì)斑塊狀聚集在核膜下，且出現(xiàn)細(xì)胞漂浮，貼壁細(xì)胞數(shù)目減少;Hoechst33258染色后，熒光顯微鏡下可見UU1干預(yù)組的細(xì)胞核致密濃染，折光性增強(qiáng)，并有凋亡小體形成。
　　 2、UU1對(duì)HeLa

4、細(xì)胞的生長(zhǎng)有抑制作用，不同UU1濃度干預(yù)后的細(xì)胞抑制率，除24小時(shí)1×104濃度組外，其他各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，且隨著UU1濃度的升高，細(xì)胞抑制作用增強(qiáng)。
　　 3、免疫熒光染色顯示UU1作用48 h后，HeLa細(xì)胞上的TLR2表達(dá)增強(qiáng);Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示:UU1非干預(yù)組細(xì)胞TLR2低表達(dá)，UU1干預(yù)組的TLR2表達(dá)水平較非干預(yù)組的增高，各UU1濃度組與對(duì)照組比較(P