致病性大腸桿菌對(duì)動(dòng)物機(jī)體免疫機(jī)能及腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響.pdf

1、本論文通過對(duì)110頭奶牛的糞樣進(jìn)行了大腸桿菌分離培養(yǎng)、生化特征鑒定、血清型分型、動(dòng)物致病性試驗(yàn)，采用O抗原定型血清鑒定出該奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)不同血清型致病性大腸桿菌的分布，其中優(yōu)勢(shì)優(yōu)勢(shì)血清型為 O1、O2、O8、O78和 O86菌株，在此基礎(chǔ)上采用動(dòng)物試驗(yàn)及實(shí)驗(yàn)室分析的方法研究致病性大腸桿菌對(duì)奶牛的內(nèi)分泌狀態(tài)及免疫功能的影響。同時(shí)通過小鼠感染血清型致病性大腸桿菌的試驗(yàn)探討致病性大腸桿菌對(duì)腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響。揭示致病性大腸桿菌在當(dāng)代奶牛養(yǎng)殖中

2、對(duì)奶牛的危害，為建立奶牛健康生產(chǎn)體系提供理論依據(jù)。論文主要包括3個(gè)試驗(yàn)：
　　試驗(yàn)一：在內(nèi)蒙古大漠林深牧場(chǎng)選取110頭荷斯坦奶牛，直腸采糞法采集糞樣。通過大腸桿菌培養(yǎng)純化、生化特征鑒定、血清型分型、動(dòng)物致病性試驗(yàn)分析奶牛腸道內(nèi)大腸桿菌的寄生情況。結(jié)果表明： O1、O2、O8、O78和 O86致病性大腸桿菌分別占定型致病性菌株的23.08%、10.26%、20.51%、10.26%和7.69%。同時(shí)有其他血清型致病性大腸桿菌，但檢出

3、率較低。
　　試驗(yàn)二：經(jīng)試驗(yàn)一分離鑒定后，選擇攜帶不同血清型致病性大腸桿菌的奶牛，體重、胎次接近，每個(gè)血清型選擇3頭，尾靜脈采血。采用放免法測(cè)定血清中與免疫相關(guān)激素、細(xì)胞因子的含量，比色法測(cè)定血清免疫球蛋白 A（IgA）與免疫球蛋白G（IgG）的含量，使用流式細(xì)胞儀測(cè)定外周血 CD3+、CD14+和 CD21+細(xì)胞所占的百分比，探討致病性大腸桿菌對(duì)奶牛免疫機(jī)能的影響。結(jié)果表明：（1）腸道內(nèi)寄生 O2、O8和 O78血清型大腸桿菌對(duì)

4、促腎上腺皮質(zhì)激素（ACTH）的影響顯著（P<0.05）；O1、O8、O78、O2和 O86血清型致病性大腸桿菌對(duì)生長(zhǎng)激素（GH）、促生長(zhǎng)因子 IGF-1含量的影響顯著（P<0.05）；O2、O78、O8和 O86血清型大腸桿菌對(duì)皮質(zhì)醇（COR）含量的影響顯著（P<0.05）；O1、O78血清型致病性大腸桿菌對(duì)促甲狀腺激素（TSH）影響顯著（P<0.05）；O8血清型致病性大腸桿菌對(duì)三碘甲腺原氨酸（T3）含量的影響顯著（P<0.05）；O

5、78血清型致病性大腸桿菌對(duì)甲狀激素（T4）與瘦素（LEP）含量的影響顯著（P<0.05）。（2） O1、O2、O78、O8和 O86血清型致病性大腸桿菌對(duì)奶牛血清白介素-2（IL-2）含量的影響顯著（P<0.05）；O1、O78、O2和 O86血清型致病性大腸桿菌對(duì)奶牛血清白介素-6（IL-6）含量的影響顯著（P<0.05）；O78、O2和O8血清型致病性大腸桿菌對(duì)奶牛血清白介素-8（IL-8）、干擾素-γ（IFN-γ）和腫瘤壞死因子-

6、α（TNF-α）含量的影響顯著（P<0.05）。（3）O1、 O78、 O8和 O86血清型致病性大腸桿菌對(duì)奶牛血清IgA、IgG含量影響顯著（P<0.05）；O2、O8和 O86血清型致病性大腸桿菌對(duì)奶牛外周血中 CD3+水平影響顯著（P<0.05），均高于對(duì)照組；攜帶 O1與 O2血清型致病性大腸桿菌奶牛外周血中 CD14+水平顯著高于對(duì)照組（P<0.05）；攜帶 O1、O2、O78和 O8血清型致病性大腸桿菌奶牛外周血中 CD21

7、+水平顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。提示腸道寄生致病性大腸桿菌導(dǎo)致奶牛的內(nèi)分泌發(fā)生變化，免疫功能下降。
　　試驗(yàn)三：將60只健康小白鼠，隨機(jī)分為6組，每組小鼠10只，進(jìn)行灌胃血清型致病性大腸桿菌 O1、O2、O78、O8和 O86菌液。灌胃前禁食12h，第一組為對(duì)照組，對(duì)照組不攻毒致病菌，其余5組分別灌胃已制備好的 O1、O2、O78、O8和O86菌液。7d后斷頸致死，迅速剖腹，取十二指腸、回腸、空腸各段大約1cm用10%中性福