蕓薹生鏈格孢(Alternaria brassicicola)AbFus3信號途徑中MAPK激酶的停泊作用位點研究.pdf

1、由蕓薹生鏈格孢菌引起的黑斑病是十字花科蔬菜生產(chǎn)上的重要病害之一，常造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。我們早期研究結(jié)果顯示，蕓薹生鏈格孢的AbFus3-MAPK信號途徑在其致病性過程中起著重要的調(diào)控作用。本文在前期研究的基礎(chǔ)上，通過MAPKK激酶AbSte7序列分析顯示其存在兩個符合MAPK停泊的共有序列(D1和D2)。利用重疊PCR技術(shù)構(gòu)建了D1和D2缺失突變體，分別研究了D1和D2在MAPK停泊中的作用。本文主要結(jié)果如下:
　　1.以pCB1

2、532為骨架質(zhì)粒，構(gòu)建了AbSte7基因的互補載體;以氯嘧磺隆為篩選標(biāo)記，成功互補了△AbSte7。進(jìn)一步比對了野生菌、△AbSte7和△AbSte7互補體的菌落形態(tài)、菌絲特征、分生孢子性狀、致病性以及黑色素產(chǎn)量，研究結(jié)果顯示△AbSte7互補體的上述性狀都恢復(fù)到野生菌水平上，說明實現(xiàn)了△AbSte7的AbSte7基因的成功互補。
　　2.利用重疊PCR技術(shù)分別擴增得到了D1位點和D2位點缺失的AbSte7基因-AbSte7△D1

3、和AbSte7△D2，以pCB1532為骨架質(zhì)粒，構(gòu)建了AbSte7△D1和AbSte7△D2基因的互補載體;轉(zhuǎn)化△AbSte7的原生質(zhì)體，利用氯嘧磺隆為篩選標(biāo)記，得到了△AbSte7/AbSte7△D1和△AbSte7/AbSte7△D2互補體。反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)顯示AbSte7基因在兩個互補體中均正常表達(dá)，但菌落形態(tài)、菌絲特征、分生孢子性狀、致病性以及黑色素產(chǎn)量的比對分析顯示，D1位點和D2位點缺失的AbSte7基因分別互補△AbSt