銀鯧淀粉卵甲藻病治療藥物的毒副作用研究.pdf

1、寧波大學(xué)銀鯧研究課題組在2013年5月-9月及2014年7月-10月，連續(xù)兩年養(yǎng)殖的銀鯧爆發(fā)了嚴(yán)重的淀粉卵甲藻病，給銀鯧養(yǎng)殖科研工作帶來(lái)了毀滅性的打擊。淀粉卵甲藻病又稱“淀粉卵渦鞭蟲(chóng)病”，是一種由原蟲(chóng)引起的常見(jiàn)于海水養(yǎng)殖魚(yú)類的寄生蟲(chóng)疾病，該病具有發(fā)病時(shí)間長(zhǎng)，感染快，死亡率高的特點(diǎn)，有報(bào)道稱硫酸銅、乙酸銅、甲醛以及淡水浸泡等都是治療該病的有效方法。然而，已有研究表明這些治療方法對(duì)不同魚(yú)類的毒副作用差異較大，由于銀鯧的人工養(yǎng)殖剛剛起步，上述

2、藥物對(duì)銀鯧的毒副作用尚不明確，因此無(wú)法掌握科學(xué)用藥的劑量以及藥浴時(shí)間，這給淀粉卵甲藻病的預(yù)防與治療造成了極大的困難。就此，本研究開(kāi)展了三種治療藥物對(duì)銀鯧幼魚(yú)的96h急性毒性試驗(yàn)和淡水脅迫試驗(yàn)，研究了不同濃度梯度下銀鯧的半致死濃度、安全濃度、血細(xì)胞微核率，并測(cè)定了三種抗氧化酶（SOD、CAT、GPX）、Na+K+ATP酶的活性變化，還著重比較了正常魚(yú)與染病魚(yú)的組織病理學(xué)，以及三種治療藥物和淡水脅迫對(duì)其鰓、肝、腎組織的影響。從而明確了銀鯧對(duì)

3、三種藥物的敏感性及藥物的毒副作用，以期為今后銀鯧養(yǎng)殖中淀粉卵甲藻病的防治提供科學(xué)的用藥指導(dǎo)，以及為銀鯧藥物毒理學(xué)研究提供理論資料。論文獲得的研究成果綜合如下：
　?。?）用解剖學(xué)及組織切片技術(shù)，觀察了淀粉卵渦鞭蟲(chóng)形態(tài)及其寄生后鰓的病理組織學(xué)結(jié)構(gòu)變化；觀察發(fā)現(xiàn)淀粉卵渦鞭蟲(chóng)呈梨形或近球形，外表面較為光滑，直徑在50μm左右，其內(nèi)部具有豐富的淀粉粒，以假根狀突起的附著器附著于銀鯧鰓小片基部汲取養(yǎng)分；感染蟲(chóng)體的銀鯧鰓組織結(jié)構(gòu)遭到嚴(yán)重破壞，

4、主要表現(xiàn)為鰓小片毛細(xì)血管擴(kuò)張、基部充血，上皮細(xì)胞破損、增生，嚴(yán)重者鰓小片發(fā)生粘連；由于鰓組織的輸氧能力遭受破壞，病魚(yú)最終因呼吸衰竭而死亡。
　?。?）采用魚(yú)類急性毒性試驗(yàn)方法，研究了硫酸銅、甲醛、乙酸銅對(duì)銀鯧幼魚(yú)的毒性試驗(yàn)。結(jié)果表明：硫酸銅對(duì)銀鯧幼魚(yú)的48h和96h半致死濃度 LC50分別為0.860和0.770mg/L，安全濃度為0.077mg/L；甲醛對(duì)銀鯧幼魚(yú)的48h和96h半致死濃度 LC50分別為110和160mg/L，

5、安全濃度為11mg/L；乙酸銅對(duì)銀鯧幼魚(yú)的48h和96h半致死濃度LC50分別為0.898和0.264mg/L，安全濃度為0.026 mg/L。三種藥物對(duì)銀鯧的毒性強(qiáng)度依次是乙酸銅>硫酸銅>甲醛。
　?。?）不同濃度的硫酸銅、甲醛和乙酸銅對(duì)銀鯧肝臟三種抗氧化酶（SOD、CAT和GPX）活性的影響均表現(xiàn)為先升高后降低的趨勢(shì)，即低濃度誘導(dǎo)高濃度抑制的拋物線型的劑量效應(yīng)關(guān)系，其中SOD對(duì)三種藥物的耐受閾值最低，即其對(duì)藥物敏感性較高，可以

6、靈敏地指示低濃度的藥物污染。
　?。?）組織學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，不同濃度的硫酸銅、甲醛和乙酸銅均會(huì)對(duì)銀鯧的鰓、肝、腎組織造成損傷。HE染色顯示：鰓組織學(xué)損傷主要是鰓小片扭曲變形，鰓絲上皮細(xì)胞增生，鰓小片充血，鰓小片末端膨大成小球狀，肝組織出現(xiàn)肝細(xì)胞輕度變性、腫脹呈彌漫疏松化，竇狀隙膨脹、損害嚴(yán)重時(shí)肝細(xì)胞溶解，細(xì)胞界限模糊；腎臟腎小管上皮腫脹，水樣變性，間質(zhì)細(xì)胞增多，嚴(yán)重者腎小管萎縮壞死。這些組織病變都顯示出劑量的關(guān)聯(lián)性。
　?。?）

7、微核實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：Cu2+能誘發(fā)銀鯧外周血紅細(xì)胞產(chǎn)生微核，另外還包括其他核異常現(xiàn)象，包括核質(zhì)內(nèi)凹、核質(zhì)外凸、雙核等，Cu2+對(duì)銀鯧具有明顯的核損傷作用。而且隨著Cu2+濃度的增加銀鯧血細(xì)胞微核率和核異常率均上升，當(dāng)Cu2+濃度達(dá)到0.670 mg/L時(shí)，血細(xì)胞微核率和核異常率均達(dá)到最大，細(xì)胞微核率達(dá)13.23‰，為對(duì)照組的12.36倍，之后隨著Cu2+濃度增加，微核率和核異常率反而下降。
　?。?）淡水浸泡治療表明：淡水脅迫時(shí)間超