ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)在肉雞組織中的定位、表達(dá)及影響因素研究.pdf

1、本文主要研究了ABC轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白在肉雞組織中的表達(dá)。試驗(yàn)采用免疫組化、real time RT-PCR以及Western blot的方法對肉雞的肝臟、十二指腸、空腸、回腸中BCRP的蛋白的表達(dá)進(jìn)行了檢測，并采取real time RT-PCR以及Western blot的定量方法探索了日齡和大腸桿菌、球蟲感染及口服恩諾沙星對肉雞不同組織中BCRP表達(dá)的影響。
　　 將肉雞肝臟、十二指腸、回腸、空腸進(jìn)行石蠟包埋后，采用免疫組織化學(xué)的方

2、法，利用抗BCRP的抗體對以上組織中的BCRP蛋白進(jìn)行組織定位。結(jié)果表明，肝臟中BCRP主要分布于肝細(xì)胞的胞漿及胞膜。在十二指腸、空腸以及回腸中，BCRP分布于腸上皮細(xì)胞以及胞核上方的胞質(zhì)中。采用real time RT-PCR和Western blot方法以β-actin為內(nèi)參對2周齡肉雞肝臟、十二指腸、空腸以及回腸BCRP的mRNA和蛋白進(jìn)行了檢測，結(jié)果表明，mRNA的表達(dá)量在肝臟中最高，其次是空腸和回腸，十二指腸中最低，其中肝臟的

3、BCRP mRNA的表達(dá)量極顯著高于十二指腸和回腸（P=0.000，P=0.004），顯著高于空腸（P=0.024）?；啬cBCRP的mRNA表達(dá)量顯著高于十二指腸(P=0.043)?？漳cBCRP的mRNA表達(dá)量極顯著高于十二指腸(P=0.006)。而Western blot結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析后表明，BCRP蛋白的表達(dá)量在不同組織中差異不顯著(P＞0.05），但是在肝臟和空腸中BCRP蛋白的表達(dá)較回腸和十二指腸的蛋白表達(dá)量略高.該結(jié)果提示肉雞

4、肝臟和腸道在mRNA和蛋白水平均有BCRP的表達(dá)，且蛋白水平和mRNA水平表達(dá)一致，具有顯著的相關(guān)性(r=0.603，P=0.05)。
　　 采用real time RT-PCR技術(shù)和Western blot方法對第0（1日齡）、1、2、4、6和8周齡肉雞肝臟、十二指腸、空腸和回腸中BCRP的表達(dá)，探討了健康肉雞組織中BCRP的表達(dá)隨著日齡變化的規(guī)律。結(jié)果表明，BCRP mRNA的表達(dá)在肝臟中從0周齡（1日齡）至第2周齡逐漸升高

5、，2周齡時mRNA表達(dá)最高，之后稍有下降，其中第2和6周齡時BCRP的mRNA表達(dá)量極顯著高于0周齡（P=0.001，P=0.01），第4周齡時BCRP mRNA的表達(dá)量顯著高于0周齡(P=0.026)。在十二指腸中從0周齡起B(yǎng)CRP mRNA表達(dá)量便出現(xiàn)下降趨勢，其中第2、4、6和8周齡時的表達(dá)量極顯著低于0周齡（P=0.000，P=0.002，P=0.000，P=0.000）。在空腸中，1、4和8周齡時BCRP mRNA的表達(dá)量極顯

6、著高于0周齡（P=0.000，P=0.01，P=0.000），2周齡時mRNA表達(dá)量顯著高于0周齡（P=0.029）。在回腸中BCRP的mRNA表達(dá)量在1周齡時出現(xiàn)最高值，極顯著高于0周齡(P=10.004)，之后出現(xiàn)降低趨勢。Western blot的結(jié)果顯示，隨著年齡的變化，BCRP蛋白的表達(dá)量雖有一定波動，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理均無顯著性變化（P＞0.05）。將mRNA和蛋白表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析后，表明在各組織中BCRP的mRNA和蛋白表達(dá)

7、并無顯著相關(guān)性(r=-0.10，P＞0.05)。該結(jié)果提示肉雞在早期生長階段BCRP mRNA表達(dá)量較高，隨日齡增加會逐漸下降，但蛋白水平隨日齡增加無顯著變化。
　　 采用real time RT-PCR和Western blot的方法，對大腸桿菌感染肉雞、球蟲感染肉雞以及口服恩諾沙星肉雞的肝臟、十二指腸、空腸和回腸中BCRP的表達(dá)進(jìn)行相對定量。結(jié)果表明肉雞感染大腸桿菌后，回腸BCRP mRNA表達(dá)極顯著上調(diào)(P=0.009)，

8、而肝臟、十二指腸及空腸的BCRP mRNA表達(dá)無顯著變化。Western blot結(jié)果表明，肉雞經(jīng)大腸桿菌感染后，十二指腸中BCRP蛋白表達(dá)量顯著上調(diào)（P=0.043），但在其他組織無顯著變化。經(jīng)大腸桿菌感染后肉雞各組織BCRPmRNA的表達(dá)和蛋白的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果表明，mRNA和蛋白的表達(dá)無顯著相關(guān)性（r=0.194，P＞0.05）。健康肉雞口服恩諾沙星后，十二指腸的BCRP的mRNA表達(dá)顯著上調(diào)（P=0.009），其他則無顯

9、著性變化。健康肉雞口服恩諾沙星后，各組織中BCRP蛋白的表達(dá)量除在空腸有上升趨勢外，其他組織中BCRP的表達(dá)基本沒有變化。將口服恩諾沙星后肉雞各組織BCRP mRNA的表達(dá)和蛋白的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果表明，mRNA和蛋白的表達(dá)無顯著相關(guān)性（r=0.177，P＞0.05）。肉雞感染球蟲后，BCRP mRNA表達(dá)量在肝臟（P=0.021）、回腸(P=0.021)和空腸(P=0.021)均出現(xiàn)顯著性下調(diào)，而在十二指腸中有輕微上調(diào)，但變化不