甜瓜細(xì)菌性果斑病和火鶴細(xì)菌性葉枯病傳播途徑及檢測技術(shù)的研究.pdf

1、甜瓜細(xì)菌性果斑病(Acidovorax avenae subsp.citrulli)和火鶴細(xì)菌性葉枯病(Xanthomonascampestris pv.dieffenbachiae)是世界性分布的毀滅病害，給瓜類產(chǎn)業(yè)和火鶴產(chǎn)業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。本研究主要從病害的傳播途徑和檢測技術(shù)方面進(jìn)行了深入研究，以期為病害的綜合防治提供一定的參考和依據(jù)。
　　 ⑴明確了帶菌種子、花粉管通道、帶菌土壤及迸濺的水滴是甜瓜細(xì)菌性果斑病的傳播途

2、徑。采用浸種法、點(diǎn)滴接種法、拌土法及水滴迸濺法接種細(xì)菌性果斑病菌于健康的甜瓜種子、雌花柱頭、土壤及幼苗上，對細(xì)菌性果斑病的傳播方式進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，浸種及點(diǎn)滴接種雌花柱頭獲得的帶菌種子均可傳?。痪林械挠酌缭诔雒绾?3d就有病癥出現(xiàn)，且隨著生長期的延長，病情逐漸加重，發(fā)病最重幼苗的病葉率和病指分別為69.13％和25.72；病原菌隨迸濺的水滴傳播時，離菌源越近的幼苗發(fā)病情況越為嚴(yán)重，病葉率和病指分別為63.34％和47.12。

3、>　　 ⑵明確了帶菌土壤及迸濺的水滴是火鶴細(xì)菌性葉枯病的傳播途徑。采用拌土法、水滴迸濺法接種細(xì)菌性葉枯病菌于健康的火鶴植株上，對細(xì)菌性葉枯病的傳播方式進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，菌土中的火鶴植株在移栽后14d有發(fā)病癥狀出現(xiàn)，后隨著移栽天數(shù)的增加，病情逐漸加重，發(fā)病最重幼苗的病葉率和病指分別為84.74％和72.31；病原菌隨迸濺的水滴傳播時，離菌源越近發(fā)病越為嚴(yán)重，病葉率和病指分別為75.00％和55.54。
　　 ⑶建立了選擇性培

4、養(yǎng)基和Nested-PCR方法檢測甜瓜帶菌種子。采用選擇性培養(yǎng)基(ASCM)對甜瓜帶菌種子上果斑菌進(jìn)行分離及富集，引用特異性引物，對ASCM培養(yǎng)液進(jìn)行Nested-PCR擴(kuò)增。結(jié)果表明，選擇性培養(yǎng)基(ASCM)，可特異性對甜瓜帶菌種子上的果斑病菌進(jìn)行分離、培養(yǎng)和富集；引物對SEQ10/SEQ12、SEQ11/SEQ12和Nested-PCR引物只在細(xì)菌性果斑病菌中分別擴(kuò)增出262bp、241bp和241bp的特異片段，在其他菌種中無特異

5、性擴(kuò)增片段。進(jìn)行常規(guī)PCR擴(kuò)增，檢測細(xì)菌性果斑病菌的靈敏度為1.92×10-4mg/L和1.92×10-3mg/L，而Nested-PCR的靈敏度可達(dá)到1.92×10-6mg/L。Nested-PCR方法檢測ASCM培養(yǎng)液的最低濃度為2×105cfu/ml。
　　 ⑷建立了Nested-PCR方法檢測火鶴細(xì)菌性葉枯病的病株。引用特異性引物，對土傳試驗(yàn)中火鶴發(fā)病植株的根、莖、葉進(jìn)行Nested-PCR擴(kuò)增。結(jié)果表明，引物對PXad

6、U/PXadL、NXadU/NXadL和Nested-PCR引物只在細(xì)菌性葉枯病菌中分別擴(kuò)增出1570bp、785bp和785bp的特異片段，在健康植株和其他菌種中均無特異性擴(kuò)增片段。用兩對引物進(jìn)行常規(guī)PCR擴(kuò)增，檢測葉枯菌的靈敏度為1.23×10-5mg/L和1.23×10-3mg/L，而Nested-PCR的靈敏度可達(dá)到1.23×10-7mg/L。Nested-PCR方法對發(fā)病植株的檢測靈敏度可達(dá)到病情指數(shù)高于16.6的樣品。