瓜類(lèi)細(xì)菌性果斑病菌tvrR基因的克隆及功能研究.pdf

1、燕麥?zhǔn)人峋鞴蟻喎N（Acidovorax avenae subsp.citrulli，Aac）引起的細(xì)菌性果斑病是瓜類(lèi)生產(chǎn)上的一種嚴(yán)重的病害，主要危害西、甜瓜的葉片和果實(shí)，產(chǎn)生大量病斑并造成果實(shí)腐爛，常造成毀滅性的后果。近年來(lái)，瓜類(lèi)細(xì)菌性果斑病在我國(guó)新疆、內(nèi)蒙古、海南、吉林、寧夏等地嚴(yán)重發(fā)生，并有上升趨勢(shì)，對(duì)我國(guó)甜瓜、西瓜及其他葫蘆科作物的生產(chǎn)構(gòu)成了嚴(yán)重的威脅，已經(jīng)成為阻礙和限制瓜類(lèi)作物進(jìn)一步發(fā)展的首要障礙，尤其是在以西瓜、哈密瓜為重要

2、經(jīng)濟(jì)作物的新疆地區(qū)。因此，需要我們盡快找到相應(yīng)的防治措施，而對(duì)瓜類(lèi)細(xì)菌性果斑病菌致病機(jī)理的研究則對(duì)該病害的防治具有重要的指導(dǎo)意義。
　　 目前，對(duì)瓜類(lèi)細(xì)菌性果斑病菌的研究主要集中在病原菌鑒定、病原菌檢測(cè)方法和技術(shù)、抗病品種的鑒定等方面。本課題組首次從果斑病菌中鑒定到了?；呓z氨酸內(nèi)酯類(lèi)化合物（acyl-homoserine lactones，簡(jiǎn)稱(chēng)AHLs）介導(dǎo)的群體感應(yīng)（quorum sensing，簡(jiǎn)稱(chēng)QS）調(diào)節(jié)系統(tǒng)，并初步明

3、確了該系統(tǒng)對(duì)病原菌致病性的影響。然而，對(duì)果斑病菌致病的分子機(jī)理仍然知之甚少。
　　 本研究根據(jù)丁香假單胞菌番茄致病變種（Pseudomonas syringae pv.tomato）DC3000中新的毒性基因tvrR（TetR-like virulence regulator）的序列，利用生物信息學(xué)知識(shí)，從瓜類(lèi)細(xì)菌性果斑病菌（A.avenae subsp.citrulli，Aac）的全基因組中克隆到tvrR基因的同源物。通過(guò)同源

4、重組的方法，構(gòu)建了tvrR基因的插入突變體，并且經(jīng)過(guò)PCR及Southern雜交驗(yàn)證確認(rèn)。對(duì)胞外多糖的產(chǎn)量、菌體游動(dòng)性和25％葡萄糖的趨化應(yīng)答能力檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，突變體的胞外多糖產(chǎn)量、游動(dòng)性和趨化能力與野生型菌株相比沒(méi)有明顯差異。煙草過(guò)敏反應(yīng)檢測(cè)顯示，突變體和野生型菌株一樣可以激發(fā)非寄主的過(guò)敏性反應(yīng)。致病性試驗(yàn)結(jié)果顯示，突變體比野生型菌株發(fā)病晚，病程延長(zhǎng)，但最終致病情況與野生型無(wú)差異。接種的寄主組織中菌體生長(zhǎng)能力檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，突變體的繁殖速度慢于