幾種蔬菜ACC氧化酶基因的克隆與鑒定.pdf

1、華中農業(yè)大學博士學位論文幾種蔬菜ACC氧化酶基因的克隆與鑒定姓名：陳銀華申請學位級別：博士專業(yè)：蔬菜學指導教師：葉志彪20050501華中農業(yè)人學2004屆博I。學位論文：蔬菜ACC軾化酶捧㈥的克降’o燎定4構建了上叫c0，，基因cDNA序列的正義、反義、RNAi載體、兩個不同長度啟動子的植物表達載體共5個。并利用農桿菌介導的遺傳轉化方法將它們成功導入番茄“中蔬5號”中。對轉基因植株的表達分析表明，外源基因的導入改變了內源基因的表達。5

2、為研究LeACOll基因上游調控元件，對兩個不同長度啟動子片段驅動的uidA(GUS)基因表達進行分析。轉基因植株組織化學分析表明，長度為1200bp和2000bp都只能在果實中指導uidA的表達。2000bp的片段能自主驅動uidA基因的特異表達，并且隨著成熟度的加深表達量逐漸增強。1200bp的片段在干旱和傷害因子的誘導下，能驅動uidA的特異表達。6從黃瓜基因組中克隆了ACC氧化酶基因CsAC04，其GenBank登錄號為AY45

3、0356。基因結構分析表明，CsAC04基因全長2200bp，有4個外顯子序列，3個內含予序列，上游序列非編碼區(qū)長784bp，外顯子全長936bp，編碼311個氨基酸殘基。以推斷的轉錄起始位NNI，5l—11為啟動子的核心區(qū)，47—39為TATA盒結構，沒有發(fā)現(xiàn)cAAT盒結構。在TATA盒上游有九個與信號轉導有關的前導響應元件。7以雌性系、雄性系、雌雄同株3個不同的性別表現(xiàn)型植株為材料，研究了CsAC04基因在各組織的表達差異。該基因在

4、雌性系、雌雄同株2個性別表現(xiàn)型的雌性花中表達，而果實、葉片中沒有表達；在雄性系植株的各組織均不表達。8進一步構建了CsAC04基因的RNAi植物表達載體。利用農桿菌介導的遺傳轉化法轉化黃瓜“滓研4號”，獲得轉基因植株5棵。轉基因植株田間表型觀察表明，CsAC04基因抑制了內源ACO基因的表達，導致轉基因植株在第20節(jié)位以內只表現(xiàn)雄花分化。9從花椰菜基因組中克隆了ACC氧化酶基因BoACO，其登錄號為AY676466。測序結果表明，所克隆

5、片段全長1202bp，包含3個外顯子、2個內含子，去除內含子后丌放閱讀框架(ORF)長756bp，編碼252個氨基酸。10對花椰菜植株不同組織器官(根、莖、葉、花)的Northern雜交分析顯示，BoACO基因在葉片和花中表達，而在根、莖中不表達，花中的表達量大于葉片中。11構建了BoACO的RNAi植物表達載體，并利用農桿菌介導的遺傳轉化法對花椰菜“南苜t60”進行了遺傳轉化，Southern雜交結果表明，其中3株花椰菜基因組中導入了