IBDV感染雛雞過程細胞因子和干擾素誘導基因的表達變化.pdf

1、傳染性法氏囊病病毒（Infectious bursal disease virus，IBDV）是導致雞體液免疫的中樞免疫器官法氏囊等淋巴組織遭受破壞的病毒性病原，它的感染能夠引起雞的急性、高度接觸性和導致 B淋巴細胞衰竭的免疫抑制性疾病----傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)。該病主要損害3-6周齡雞的法氏囊等淋巴組織，同時造成雛雞免疫機能障礙，進而影響多種疫苗的免疫應(yīng)答，最終導致疫苗免疫失敗

2、。本研究通過模擬雞傳染性法氏囊病模型，檢測IBDV感染雛雞過程中，法氏囊組織細胞因子和干擾素誘導基因的轉(zhuǎn)錄表達變化，確定促炎癥因子和抗炎性因子的轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控及抗病毒基因的轉(zhuǎn)錄水平調(diào)控。檢測的細胞因子包括干擾素、白細胞介素、腫瘤壞死因子和轉(zhuǎn)化生長因子，干擾素誘導基因包括Mx、Viperin和干擾素誘導跨膜蛋白。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴實驗室保存的IBDV通過點眼和滴鼻途徑感染19日齡雛雞，建立雞傳染性法氏囊病模型。雛雞感染病毒后

3、表現(xiàn)為精神不振和食欲減退，且有雞只排出白色稀便；病理學觀察發(fā)現(xiàn)感染前期法氏囊組織充血、濾泡萎縮；法氏囊組織IBDV VP3抗原免疫組化檢測顯示，隨著感染時間的延長，陽性顆粒的表達呈現(xiàn)先增加后減少趨勢，這些都符合IBDV感染規(guī)律，表明IBD模型建立成功。⑵應(yīng)用熒光實時定量PCR（Quantitative real-time PCR，qRT-PCR）技術(shù)檢測IBDV感染過程中雛雞法氏囊中細胞因子基因的表達變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，IBDV感染過程中干

4、擾素類基因的表達變化整體呈現(xiàn)先增加后降低趨勢，并且可以明顯看出，IFN-γ和IFN-λ的基因表達量要高于IFN-ɑ和IFN-β的表達量，檢測的干擾素在IBDV感染后24 h轉(zhuǎn)錄表達被激活，將行使各自不同的生物學功能。IFN-β和IFN-λ在IBDV感染后96 h的轉(zhuǎn)錄水平達到最高，這時也是免疫組化檢測IBDV病毒粒子最多的時期，IFN-β的轉(zhuǎn)錄表達在IBDV感染后72 h有被抑制的現(xiàn)象。IFN-γ的轉(zhuǎn)錄表達在IBDV感染期間一直處于較高

5、水平，可能與激活促炎性因子的表達有關(guān)。白細胞介素類作為一類既能應(yīng)對病毒感染的應(yīng)答因子，但也有一些能促進炎癥的持續(xù)發(fā)展，對機體的恢復不利。研究結(jié)果表明白細胞介素類基因的表達上調(diào)幅度較干擾素類基因小，但與對照組相比，其基因的表達量明顯增加。IBDV感染后的24-120 h，促炎癥的IL-1β、IL-6和IL-8基因的表達量明顯高于檢測的其它時間點，到感染后期，逐漸恢復到感染前水平，而抗炎性的 IL-7和IL-10的基因表達量在感染后期仍處于

6、較高水平。促炎性的 TNF-α和抗炎性的TGF-β的基因表達也受到 IBDV感染的影響，作為主要促炎性因子的TNF-α在IBDV感染后12 h的轉(zhuǎn)錄就被激活，在IBDV感染時間段的大部分時間都高于對照組，而TGF-β的基因表達水平在IBDV感染后期的才逐漸提升，這可能與TNF-α和TGF-β的功能有關(guān)。⑶對于干擾素誘導的抗病毒基因的轉(zhuǎn)錄表達分析發(fā)現(xiàn)：IBDV感染48 h后，干擾素誘導抗病毒基因的轉(zhuǎn)錄表達水平迅速上調(diào)，除Viperin外，

7、高表達都能持續(xù)到病毒感染后期。Mx基因的表達量在72 h達到最大值，而Viperin基因的表達量在48 h達到最大值；干擾素誘導跨膜蛋白基因（IFITM1、IFITM3和IFITM5）表達量的最大值也在IBDV感染后72 h。其中Mx和IFITM3在IBDV感染后的轉(zhuǎn)錄表達模式一致，Viperin、IFITM1和IFITM5的轉(zhuǎn)錄表達模式比較接近。IBDV感染后干擾素誘導的抗病毒基因轉(zhuǎn)錄表達水平的高表達可能與它們的蛋白發(fā)揮抗病毒作用有關(guān)