北京油雞α-干擾素的克隆和表達(dá)研究.pdf

1、本論文以北京油雞肝臟總RNA作為模板，通過RT-PCR方法克隆α-干擾素目的基因片段連接到pGEM-T Easy載體上，構(gòu)建北京油雞克隆載體，再利用雙酶切法構(gòu)建北京油雞真核表達(dá)載體pEGFP-C1-α-IFN，并把真核表達(dá)載體轉(zhuǎn)染到蒙古馬和阿勒泰羊耳緣組織成纖維靶細(xì)胞中表達(dá)。所得試驗(yàn)結(jié)果如下: 1.北京油雞肝臟提取的總RNA為模板，通過RT-PCR方法克隆出雞α-IFN基因，片段大小為582bp，并提交基因序列于GenBank獲

2、取收錄號。 2.采用組織塊貼壁培養(yǎng)法對蒙古馬和阿勒泰羊耳緣組織成纖維靶細(xì)胞進(jìn)行原代、傳代培養(yǎng)及凍存，并對其進(jìn)行細(xì)胞活率、生長曲線、微生物污染、染色體核型、同工酶酶譜和綠色熒光蛋白外源基因表達(dá)等鑒定，得到了細(xì)胞生長健康，形態(tài)良好，未受別種細(xì)胞污染，遺傳性能穩(wěn)定，外源基因轉(zhuǎn)染的細(xì)胞形態(tài)和生長狀態(tài)良好的靶細(xì)胞。 3.采用SalI、EcoRI雙酶切法建立了北京油雞pEGFP-Cl-α-IFN真核表達(dá)載體，并在靶細(xì)胞中的表達(dá)結(jié)果顯