采用自制培養(yǎng)基培養(yǎng)奶牛乳腺上皮細(xì)胞可行性研究.pdf

1、該研究在建立了奶牛乳腺上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)方法的基礎(chǔ)上，研究了自制培養(yǎng)基對奶牛乳腺上皮細(xì)胞生物學(xué)功能的影響，分別從細(xì)胞生長曲線、細(xì)胞增殖能力、酪蛋白基因表達(dá)及酪蛋白合成方面進(jìn)行了初步探討。該研究的目的旨在驗(yàn)證自制培養(yǎng)基是否會對奶牛乳腺上皮細(xì)胞的生物學(xué)功能造成負(fù)面的影響，為下一步試驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下：
　?。?）采用酶消化和乳汁分離法分別對乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)，根據(jù)成纖維細(xì)胞和乳腺上皮細(xì)胞對胰蛋白酶的敏感性不同對原代

2、培養(yǎng)的乳腺上皮細(xì)胞進(jìn)行純化，并進(jìn)行傳代、凍存與復(fù)蘇，對得到的細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生長特性、免疫組織化學(xué)鑒定。結(jié)果顯示：分離得到的細(xì)胞培養(yǎng)后呈鵝卵石鋪路石樣，細(xì)胞之間連接緊密且界限清晰，單層生長；細(xì)胞生長曲線呈S形，具有明顯的潛伏期、指數(shù)生長期、平臺期，細(xì)胞于第3d進(jìn)入指數(shù)生長期于第7d進(jìn)入平臺期，符合一般的細(xì)胞生長規(guī)律；CK-18（細(xì)胞角蛋白18）的免疫組化鑒定結(jié)果呈現(xiàn)出強(qiáng)陽性，說明分離得到的細(xì)胞屬典型的上皮細(xì)胞。
　?。?）研究了自

3、制培養(yǎng)基對乳腺上皮細(xì)胞生物學(xué)功能的影響。試驗(yàn)采用完全隨機(jī)試驗(yàn)設(shè)計(jì)，對照組為 DMEM/F12培養(yǎng)基，試驗(yàn)組為自制培養(yǎng)基。每個(gè)處理均設(shè)三個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)三個(gè)平行。試驗(yàn)結(jié)果如下：使用自制培養(yǎng)基的乳腺上皮細(xì)胞指數(shù)生長期的細(xì)胞活力要明顯弱于DMEM/F12培養(yǎng)基，但是在延遲期（接種48h）內(nèi)細(xì)胞的增值活力并不弱于DMEM/F12培養(yǎng)基；自制培養(yǎng)基在接種后48h內(nèi)對乳腺上皮細(xì)胞的增殖活力要顯著高于（P<0.0001）DMEM/F12培養(yǎng)基；與DM