免疫復合物在PRRSV-ADE作用中的研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PorcineReproductiveandRespiratorySyndromevirus，PRRSV)是能夠引起豬繁殖與呼吸綜合征(PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome，PRRS)的一種具有傳染性的病毒，該病毒主要造成仔豬呼吸障礙和母豬流產。PRRSV易變異，是單股正鏈RNA病毒，可引起豬的持續(xù)性感染和免疫抑制，具有抗體依賴性增強作用(Antibody-depen

2、dentenhancement，ADE)，因此研究PRRSV的ADE作用感染機制對PRRS的防治具有重要意義。FcγR可分為激活型和抑制型兩種，而FcγRⅡB是目前發(fā)現的唯一的抑制型的受體，在天然免疫和適應性免疫反應中發(fā)揮調節(jié)作用。本研究通過研究免疫復合物經FcγR途徑增強PRRSV增殖作用，為進一步深入研究免疫復合物對PRRSV-ADE的調節(jié)作用機制提供理論依據。
　　 本研究以不同濃度非感染性免疫復合物分別處理豬肺泡巨噬細胞

3、(PAM細胞)，經PRRSV感染48h后用已建立的PRRSVSYBRGreenⅠ實時定量PCR方法檢測感染細胞中病毒RNA。結果顯示，當非感染性免疫復合物作4倍和8倍稀釋時，PRRSV的復制水平較病毒感染組略為升高，說明免疫復合物能經FcγR以非劑量依賴性方式增強PRRSV復制。本試驗用5倍稀釋鼠抗豬FcγRⅡB抗體特異封閉PAM細胞表面FcγRⅡB受體，經不同濃度的非感染性免疫復合物與病毒的混合物感染PAM細胞48h后用同樣的方法檢測

4、感染細胞中病毒RNA。結果顯示，2倍(2.635mg/mL)稀釋的免疫復合物在FcγRⅡB被封閉的情況下同樣能明顯的促進病毒增殖，表明免疫復合物可通過激活型FcγR增強病毒復制。在上述試驗基礎上，又選擇4倍稀釋的免疫復合物(1.30mg/mL)分別于感染前、感染后、或與病毒同時來處理PAM細胞，感染12h、24h、36h和48h后用實時定量PCR方法檢測感染細胞中病毒RNA。結果顯示，非感染性免疫復合物在感染12，24和36h時間段內均

5、能明顯促進病毒的增殖，但在48h后不顯著。說明免疫復合物在感染36小時內促進病增殖效果最強。
　　 本研究以4倍稀釋的免疫復合物處理PAM細胞，處理12h、24h、36h和48h后用相對熒光定量PCR方法分別檢測PAM細胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA水平，結果顯示，在處理24，36和48h時間段內，免疫復合物均能降低IFN-α和IL-10的mRNA水平，但和正常細胞相比沒有明顯差異，而TNF-α的mRNA水平較

6、正常細胞略為升高。本試驗以4倍稀釋的免疫復合物分別于感染前、感染后、或與病毒同時來處理PAM細胞，用相對熒光定量PCR方法分別檢測PAM細胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA水平。結果顯示，在感染48h后，免疫復合物能明顯升高PRRSV誘導的IFN-α和TNF-α的mRNA水平，但在36h前沒有明顯規(guī)律，而在各時間段內，均能降低IL-10的mRNA水平。說明免疫復合物經FcγR調節(jié)PRRSV誘導的細胞因子轉錄沒有明顯規(guī)律，這

7、可能是因為免疫復合物同時能與激活型和抑制型FcγR結合造成的。
　　 本研究用5倍稀釋鼠抗豬FcγRⅡB抗體封閉PAM細胞，經PRRSV感染12h、24h、36h和48h后用實時定量PCR方法檢測感染細胞中病毒RNA，同時用相對熒光定量PCR方法分別檢測各組PAM細胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA水平。實驗結果顯示，在感染12和24h時間段內，封閉組中病毒復制水平略低于病毒感染組，但差異不顯著。而在感染36h時間

8、段內，病毒的復制水平明顯升高，但在48h時間段內，病毒的增殖與病毒感染組相比變化不明顯。說明FcγRⅡB的選擇性激活對PRRSV增殖的影響表現為先抑制后促進。同時在病毒感染各時間段內，封閉組中IFN-α和TNF-αmRNA水平均高于病毒感染組，而IL-10的mRNA水平則明顯下降，且顯著低于病毒感染組。說明FcγRⅡB的選擇性激活在PRRSV感染的免疫反應中能增強抗病毒因子的水平。以上結果也說明PRRSV在細胞內增殖可能并不完全與細胞內