蛋白激發(fā)子基因peaT1和拒食蛋白基因xnAFP2轉(zhuǎn)化水稻的研究.pdf

1、PeaT1是來源于極細(xì)鏈格孢菌(Alternaria tenuissima)的蛋白激發(fā)子,具有促進(jìn)植物生長(zhǎng)、提高植物的抗旱能力和誘導(dǎo)植物廣譜抗病性等功能；XnAFP2是從嗜線蟲致病桿菌(Xenorhabdusnematophila)北京變種CB6菌株中分離得到的對(duì)多種昆蟲具有拒食活性的蛋白。為了實(shí)現(xiàn)拒食蛋白XnAFP2和蛋白激發(fā)子PeaT1在水稻中的表達(dá)并進(jìn)一步研究其功能,本研究建立了水稻品種多系一號(hào)的組織培養(yǎng)體系,通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法

2、獲得了xnAFP2和peaT1的轉(zhuǎn)基因植株,PCR、RT-PCR、Southern blot和Western blot分別證實(shí)了目的基因的整合、轉(zhuǎn)錄和表達(dá),分析了peaT1轉(zhuǎn)化株的抗旱能力。
　　 本研究獲得的主要結(jié)果如下:
　　 1.構(gòu)建了植物表達(dá)載體pCAMBIA2300-35S-xnaFP2-OCS和pCAMBIA2300-35S-peat1-OCS,該載體多個(gè)表達(dá)調(diào)控元件,可以增強(qiáng)目的基因在水稻中的表達(dá)水平,載體

3、的正確性通過酶切和測(cè)序驗(yàn)證,熱激法將載體成功轉(zhuǎn)化根癌農(nóng)桿菌(Agrobactrium tumefaciens)菌株LBA4404。
　　 2.通過比較N6、MS、NB培養(yǎng)基對(duì)于水稻恢復(fù)系多系一號(hào)成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)效果,證實(shí)N6培養(yǎng)基較適合多系一號(hào)成熟胚的組織培養(yǎng)。在此基礎(chǔ)上,通過根癌農(nóng)桿菌(Agrobacteriummmefaicens)介導(dǎo)轉(zhuǎn)化法將拒食蛋白基因xnAFP2導(dǎo)入多系一號(hào)(Duoxi1)基因組、極細(xì)鏈格孢菌蛋白激

4、發(fā)子基因peaT1導(dǎo)入多系一號(hào)和日本晴(Nipponbare)基因組,并將轉(zhuǎn)基因植株繁殖到T2代。
　　 3.通過PCR篩選陽(yáng)性水稻轉(zhuǎn)化株,Southern雜交進(jìn)一步證實(shí)了目的基因整合到水稻基因組中,RT-PCR驗(yàn)證了目的基因在水稻細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄,Western雜交驗(yàn)證了peaT1基因可以在水稻細(xì)胞中得以表達(dá)。
　　 4.通過對(duì)單拷貝株系后代遺傳分析表明,xnAFP2和peaT1基因在轉(zhuǎn)基因后代中的分離符合3:1的理論比例