核盤菌蛋白激發(fā)子SsCut的基因克隆、原核表達(dá)及誘導(dǎo)植物的多重防衛(wèi)反應(yīng).pdf

1、核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary）引起的油菜菌核病是油菜上的一種重要病害。目前對(duì)于該病的防治主要采取以種植抗病品種為基礎(chǔ)、改進(jìn)栽培管理、適時(shí)化學(xué)防治的綜合治理策略。由于生產(chǎn)上缺乏高抗品種，農(nóng)業(yè)防治費(fèi)時(shí)費(fèi)工且收效甚微，化學(xué)防治又易導(dǎo)致環(huán)境污染、農(nóng)藥殘留及抗藥性。因此，需要發(fā)展天然且環(huán)境友好型的制劑對(duì)油菜菌核病進(jìn)行防治。激發(fā)子可替代化合物，誘發(fā)植物的抗病性，從而阻止或限制病害的發(fā)生和擴(kuò)展。<

2、br>　　本研究根據(jù)核盤菌的全基因組數(shù)據(jù)信息，通過基因芯片信息篩選出可能誘導(dǎo)植物產(chǎn)生非寄主抗性的角質(zhì)酶基因。在實(shí)驗(yàn)中，對(duì)核盤菌編碼角質(zhì)酶的SsCut基因(GenBank Accession No.XM_001590986.1)進(jìn)行了克隆，該基因片段大小為609 bp，編碼分子量為20.4 kDa含有202個(gè)氨基酸的多肽，SsCut異源表達(dá)產(chǎn)物(His-SsCut)能夠引起煙草葉片類似過敏性壞死反應(yīng)(Hypersensitive resp

3、onse，HR)的壞死斑，同時(shí)還能引起擬南芥(Arabidopsis)、大豆(Glycine max)、油菜(Brassica napus)、水稻(Oryza sativa)、大麥(Zea mays)和小麥（Triticum aestivum）等其他雙子葉和單子葉植物葉片的壞死反應(yīng)。此外，激發(fā)子His-SsCut處理后與植物抗病相關(guān)的過氧化氫、苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia lyase，PAL），過氧化物酶(

4、Peroxidase，POD)和多酚氧化酶(Polyphenol oxidase，PPO)也有顯著的變化。激發(fā)子His-SsCut能明顯提高植株的抗性，顯著抑制大豆疫霉(Phytophthora sojae)、煙草疫霉(P.nicotianae)和核盤菌（S.sclerotiorum）在寄主上的病斑擴(kuò)展。實(shí)時(shí)熒光定量PCR顯示，激發(fā)子能夠調(diào)節(jié)與抗病相關(guān)基因和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)基因的表達(dá)。本研究證明激發(fā)子His-SsCut能夠觸發(fā)植物的防衛(wèi)反應(yīng)