不同菌源誘導(dǎo)免疫的黃粉蟲抗菌肽抑菌活性及其Tricine-SDS-PAGE分析.pdf

1、本論文以饑餓處理后的黃粉蟲(Tenebrio molitor)幼蟲為試驗(yàn)材料,通過(guò)飼4株細(xì)菌、針刺后飼10株真菌、1株放線菌誘導(dǎo)免疫,經(jīng)研磨、加熱、冷凍離心法獲得抗菌肽提取物,采用抑菌圈法測(cè)定其對(duì)24種植物病原真菌和2種動(dòng)物病原細(xì)菌抑菌活性,利用三等分法劃分四種類型評(píng)價(jià)抑菌活性及抑菌譜；計(jì)算抑菌活性前3位處理的頻次；用Tricine-SDS-PAGE法分離純化、Gel-Pro analyzer軟件分析不同菌源誘導(dǎo)免疫所產(chǎn)生的抗菌肽差異,

2、測(cè)定主要活性成分的分子量。結(jié)果如下:
　　 1、不同菌源誘導(dǎo)免疫的黃粉蟲抗菌肽抑菌活性上存在明顯差異
　　 不同菌源誘導(dǎo)免疫的黃粉蟲抗菌肽抑菌活性較好的有番茄灰霉病病菌、黃瓜灰霉病病菌、白菜黑斑病病菌、辣椒根腐病病菌等,其中采用球孢白僵菌(家蠶)誘導(dǎo)后的提取物對(duì)番茄灰霉病病菌最大抑菌活性直徑達(dá)到6.23mm,而采用淺灰鏈霉菌誘導(dǎo)后的提取物對(duì)小麥根腐病病菌最大抑菌活性直徑達(dá)到0.94mm。對(duì)番茄灰霉病病菌、甘薯軟腐病病菌的

3、高活性、中活性區(qū)處理數(shù)之和最高(32個(gè)),各占總處理數(shù)(60)的53％,而對(duì)甘薯黑斑病病菌高活性、中活性區(qū)處理數(shù)之和最低(2個(gè)),占總處理數(shù)的3％；對(duì)甜瓜炭疽病病菌無(wú)活性處理數(shù)最高(44個(gè)),占總處理數(shù)73％,而對(duì)金黃色葡萄球菌無(wú)活性處理數(shù)最低(4個(gè)),占總處理數(shù)7％。
　　 2、黃粉蟲抗菌肽誘導(dǎo)處理間在抑菌譜方面存在明顯差異
　　 與對(duì)照組相比,經(jīng)枯草芽孢桿菌、Bt、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌誘導(dǎo)第1、2、3天誘導(dǎo)處理在

4、高活性、中活性、低活性區(qū)抑菌水平抑菌譜數(shù)目增加,無(wú)活性抑菌譜數(shù)目明顯減少,其中枯草芽孢桿菌誘導(dǎo)抑菌活性最為明顯；經(jīng)蟲生真菌及生防放線菌淺灰鏈霉菌誘導(dǎo)處理絕大部分抑菌譜數(shù)在高活性區(qū)明顯增加,中活性區(qū)增加,無(wú)活性區(qū)明顯減少,而經(jīng)普通真菌干酵母誘導(dǎo)處理基本維持在對(duì)照水平上。值得注意的是抗菌譜種類不盡相同。
　　 3、黃粉蟲抗菌肽抑菌活性前3位誘導(dǎo)處理頻次上存在明顯差異
　　 頻次順序依次為生防細(xì)菌、蟲生真菌、殺蟲放線菌及動(dòng)物病

5、原細(xì)菌等,其中枯草芽孢桿菌誘導(dǎo)處理出現(xiàn)頻次最高,達(dá)到11.5,球孢白僵菌(家蠶)、Bt、CK(水)誘導(dǎo)處理出現(xiàn)頻次最低,達(dá)到2.6,最高頻次是最低頻次的4.4倍左右。生防微生物可以更好地誘導(dǎo)昆蟲抗菌肽的表達(dá)。
　　 4、不同菌源誘導(dǎo)免疫的黃粉蟲抗菌肽種類有一定差異
　　 不同菌源誘導(dǎo)免疫的黃粉蟲抗菌肽種類不完全相同,同一菌源誘導(dǎo)免疫的黃粉蟲抗菌肽種類、數(shù)量隨提取時(shí)間也存在一定差異。獲得了4.2kD、5.2kD、6.6kD

6、、6.9kD、11.0kD、12.6kD、13.2kD、14.7kD、17.8kD、18.7kD、23.6kD、24.4kD、25.1kD、25.3kD、25.8kD、26.0kD、27.6kD、28.5kD(已報(bào)道的在4.5kD左右)等一系列多肽條帶(電泳純)。例如對(duì)番茄灰霉病病菌效果好的球孢白僵菌(家蠶)誘導(dǎo)后第2天提取的黃粉蟲抗菌肽表達(dá)了5.2kD、6.6kD、11.0kD、18.7kD等多肽。
　　 5、選擇適宜的誘導(dǎo)方