花生文庫(kù)構(gòu)建和逆境脅迫基因的分離與表達(dá)鑒定.pdf

1、花生是世界上重要的經(jīng)濟(jì)作物和油料作物之一,也是許多發(fā)展中國(guó)家植物油和蛋白質(zhì)的重要來(lái)源?；ㄉa(chǎn)的發(fā)展對(duì)于增加農(nóng)民收入和保障國(guó)家油料安全具有重要意義。
　　 果針是實(shí)現(xiàn)花生地上開(kāi)花、地下結(jié)莢的器官,果針的研究歷來(lái)受到植物學(xué)家的重視。花生在其生長(zhǎng)發(fā)育以及儲(chǔ)存過(guò)程當(dāng)中極易受到各種病原菌尤其是黃曲霉的浸染,嚴(yán)重影響花生生產(chǎn)、加工和貿(mào)易。果皮是花生莢果的屏障,對(duì)保護(hù)種仁、抵御病蟲(chóng)侵染和環(huán)境脅迫至關(guān)重要。種皮滲透性低,韌性強(qiáng),耐破損等特征及

2、其完整性可抵御黃曲霉菌的入侵和定殖。因此花生果皮及種皮的研究具有重要的科學(xué)和實(shí)用價(jià)值。此外,花生生長(zhǎng)發(fā)育易受到其他各種環(huán)境因素諸如低溫、干旱、營(yíng)養(yǎng)匱乏等的影響,而造成花生減產(chǎn)以及品質(zhì)下降。克隆花生抗逆基因?qū)槔斫饣ㄉ鼓娣肿訖C(jī)理提供理論依據(jù),對(duì)改良花生品種奠定基礎(chǔ)。
　　 cDNA文庫(kù)的構(gòu)建和篩選是基因克隆的重要方法之一,是目前發(fā)現(xiàn)新基因和研究基因功能的基本工具。SMART法由Clontech公司創(chuàng)建,主要利用PowerScri

3、ptTMRT反轉(zhuǎn)錄酶和內(nèi)切酶SfiⅠ的特性,快速、簡(jiǎn)單地構(gòu)建全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)。本論文以本實(shí)驗(yàn)室花生閩花6號(hào)為材料,運(yùn)用SMART法構(gòu)建了花生果針、果皮、種皮及各種脅迫處理混合全長(zhǎng)cDNA文庫(kù)。經(jīng)鑒定,果針原始文庫(kù)的滴度為1.3×106cfu、果皮文庫(kù)為1.3×107cfu、種皮文庫(kù)為1.23×106cfu、逆境脅迫文庫(kù)為8.86×106cfu。果針文庫(kù)重組率大100％、果皮文庫(kù)為95.5％、種皮文庫(kù)為93.3％、逆境脅迫文庫(kù)為97.6％

4、。大部分插入片段在1.0-2.0kb之間,插入片段平均大小大于1.0kb。
　　 本論文在以閩花6號(hào)454測(cè)序及基因芯片篩選的基礎(chǔ)上,從中篩選了14個(gè)受逆境脅迫影響的基因,運(yùn)用半定量RT-PCR技術(shù)分析了各種脅迫處理下的各基因表達(dá)變化,詳細(xì)分析了在ABA、水楊酸、乙烯利或多效唑處理后不同基因在不同時(shí)期的表達(dá)模式,結(jié)果表明,有兩個(gè)基因的表達(dá)受到ABA的誘導(dǎo)、六個(gè)基因受水楊酸誘導(dǎo)、兩個(gè)受乙烯利誘導(dǎo)、三個(gè)受多效唑誘導(dǎo)。此外還對(duì)14個(gè)基