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文檔簡介
1、豬繁殖與呼吸綜合癥(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是危害世界養(yǎng)豬業(yè)的重要傳染病,目前我國主要用疫苗接種預(yù)防,但預(yù)防效果不理想。據(jù)報道,豬CD151能與PRRSV3’非翻譯區(qū)(UTR)結(jié)合,CD151抗血清處理MARC-145細胞可完全阻斷PRRSV感染,但用此抗血清處理豬巨噬細胞能否阻斷PRRSV感染尚不清楚。為了回答這一問題,本實驗根據(jù)發(fā)表的序列設(shè)計引物,用RT-
2、PCR從豬肺巨噬細胞細胞中擴增CD151胞外區(qū)編碼序列,序列測定結(jié)果顯示,擴增產(chǎn)物與發(fā)表序列的核苷酸同源性為99.7%,氨基酸序列同源性為99.2%。將豬CD151胞外區(qū)編碼序列與羊細胞毒性T細胞相關(guān)抗原4(cytotoxic Tlymphocyte-associated antigen-4,CTLA-4)胞外區(qū)(IgV)編碼序列融合,構(gòu)建融合表達載體pET-IgV-CD151。經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后,重組大腸桿菌表達預(yù)期的30kDa融合蛋白
3、。用包涵體分離法獲得純化的重組蛋白。以50μg蛋白/只的劑量3次免疫小鼠后,間接ELISA抗體效價可達1:150000。以制備的免疫血清進行Western bloting試驗,結(jié)果在CD151+PAM中能檢測到預(yù)期的29kDa蛋白條帶,在CD151-PK-15細胞中未能檢測到同樣的蛋白條帶。先用不同稀釋倍數(shù)的免疫血清處理MARC-145,然后用PRRSV感染,感染后定期觀察細胞病變和進行組織細胞半數(shù)感染劑量(TCID50)測定,結(jié)果在接
4、種后的72小時內(nèi),免疫血清處理能阻斷PRRSV對MARC-145細胞的感染,阻斷作用具有血清劑量依賴性和毒株差異性,完全阻斷2株P(guān)RRSV感染的免疫血清稀釋倍數(shù)分別1:20和1:40;再用不同稀釋倍數(shù)的免疫血清與PRRSV孵育,然后接種PAM或MARC-145細胞,定期進行細胞病變觀察和TCID50測定,結(jié)果在接種后的72小時內(nèi),免疫血清處理也能阻斷PRRSV對MARC-145細胞的感染,完全阻斷2株P(guān)RRSV感染的免疫血清稀釋倍數(shù)分別
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