朵麗蝶蘭成花相關(guān)基因DhPRP39和DhFVE的分離與功能驗(yàn)證.pdf

1、朵麗蝶蘭（Doritaenopsis）為蘭科蝴蝶蘭屬多年生草本花卉，由蝴蝶蘭（Phalaenopsis）與朵麗蘭（Doritis）雜交而成，與傳統(tǒng)的蝴蝶蘭相比，其花色更加豐富艷麗，花期更長(zhǎng)，在國(guó)內(nèi)外花卉市場(chǎng)上深受消費(fèi)者歡迎，是蝴蝶蘭中栽培最廣泛、應(yīng)用最普及的雜交種類之一，具有較高的觀賞價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
　　 本研究通過(guò)對(duì)前期利用抑制差減雜交技術(shù)建立的cDNA文庫(kù)中的EST序列進(jìn)行比對(duì)分析，篩選出兩個(gè)與擬南芥(Arabidopsi

2、sthaliana)中PRP39和FVE同源性很高的序列，以出瓶7個(gè)月左右的朵麗蝶蘭‘TinnyTender’(DoritaenopsisHappysmile×Happyvalentine)克隆苗為試材，利用RACE技術(shù)分離基因的cDNA全長(zhǎng)，并通過(guò)轉(zhuǎn)基因進(jìn)行功能驗(yàn)證，取得的主要研究結(jié)果如下:
　　 1、利用RACE的方法克隆到了朵麗蝶蘭中DhPRP39和DhFVE兩個(gè)基因的cDNA全長(zhǎng)，其中，DhPRP39基因的cDNA全長(zhǎng)2

3、962bp，含有一個(gè)2472bp的ORF區(qū)，編碼823個(gè)氨基酸，登錄號(hào)為:JF508182;DhFVE基因的cDNA全長(zhǎng)1856bp，含有一個(gè)1407bp的ORF區(qū)，編碼468個(gè)氨基酸，登錄號(hào)為:JF508181。
　　 2、通過(guò)對(duì)不同時(shí)期朵麗蝶蘭的根、莖、葉、花梗、花蕾及花器官（花瓣、萼片、唇瓣和蕊柱）進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR，建立了DhPRP39和DhFVE基因的時(shí)空表達(dá)譜，結(jié)果顯示DhPRP39和DhFVE基因可能參與了朵麗蝶蘭

4、從營(yíng)養(yǎng)生長(zhǎng)向生殖生長(zhǎng)轉(zhuǎn)變的起始階段，可能在花序啟動(dòng)過(guò)程中發(fā)揮重要作用。
　　 3、以pCAMBIA1301為植物表達(dá)載體，pMD20-T為中間載體，構(gòu)建了PC1301-DhPRP39和PC1301-DhFVE兩個(gè)正義表達(dá)載體。
　　 4、采用蘸花法侵染擬南芥，利用潮霉素篩選純合子并觀察其表型變化，結(jié)果表明，DhPRP39和DhFVE轉(zhuǎn)基因植株的開(kāi)花時(shí)間均有不同程度的延遲，在DNA和RNA水平上均能檢測(cè)到相應(yīng)基因在轉(zhuǎn)基因植