CAPN1基因?qū)﹄u肌肉嫩度性狀的遺傳效應及其表達規(guī)律研究.pdf

1、本試驗選取我國廣東清遠市的優(yōu)質(zhì)雞品種-清遠麻雞和一個國外引進雞品種-隱性白羽雞作為研究對象，將CAPN1基因作為影響雞肉嫩度性狀的候選基因，采用PCR-SSCP和測序相結(jié)合的方法，在清遠麻雞和隱性白羽雞群體中對CAPN1基因進行單核苷酸多態(tài)性(SNPs)掃描并分析其與肌肉嫩度等肉質(zhì)性狀之間的關(guān)系；同時利用SYBR Green I熒光定量PCR法檢測了CAPN1基因在清遠麻雞和隱性白羽雞胸肌和腓腸肌組織中的時空表達規(guī)律。試驗結(jié)果如下：

2、r>　　 1.CAPN1基因多態(tài)性檢測。
　　 采用PCR-SSCP的方法對清遠麻雞和隱性白羽雞CAPN1基因的編碼區(qū)序列及3′調(diào)控區(qū)部分序列進行了SNPs檢測。結(jié)果在3對引物的擴增序列中檢測到了多態(tài)性，分別為外顯子5中T2507C突變，C2546T突變，外顯子6中G3535A突變以及3′調(diào)控區(qū)的G9950A突變，位于編碼區(qū)的3個突變均沒有引起相應氨基酸的改變，故均為沉默突變。統(tǒng)計了不同多態(tài)位點在不同品種中的基因型頻率和基因頻

3、率，發(fā)現(xiàn)基因型分布在不同品種中存在差異。外顯子5的多態(tài)位點在隱性白羽雞中發(fā)現(xiàn)了A、B2個等位基因和AA、AB、BB三種基因型，AA型為野生型，BB型在2546處存在C/T突變，其中B等位基因頻率(0.752)明顯高于A等位基因頻率(0.248)，在清遠麻雞中則發(fā)現(xiàn)了A、B、C3個等位基因和AA、AB、BB、AC、BC、CC六種基因型，CC型個體同時存在T2507C突變和C2546T突變，其中C等位基因的頻率為0.188；3′調(diào)控區(qū)的多態(tài)

4、位點在兩個雞品種中均發(fā)現(xiàn)了G、A兩個等位基因和GG、GA、AA三種基因型，在清遠麻雞群體中G等位基因的頻率(0.675)高于A等位基因頻率(0.325)，在隱性白羽雞群體中G等位基因的頻率(0.484)則略低于A等位基因頻率(0.516)；外顯子6在兩個雞品種中均發(fā)現(xiàn)了G、A兩個等位基因和GG、GA、AA三種基因型，在清遠麻雞群體中G等位基因的頻率(0.190)明顯低于A等位基因頻率(0.810)，而在隱性白羽雞中則完全相反，G等位基因

5、的頻率(0.840)明顯高于A等位基因頻率(0.160)。
　　 2.CAPN1基因各SNPs位點與肉質(zhì)性狀的關(guān)系。
　　 不同品種、不同基因型的個體剪切力值最小二乘分析結(jié)果表明：在SNPC5位點上，存在顯著的品種效應，在隱性白羽雞中存在顯著的基因型效應，AB型和BB型個體的剪切力值顯著高于AA型(P＜0.05)，AB型個體剪切力值稍高于BB型個體，但兩者之間的差異不顯著；而清遠麻雞中基因型效應卻不顯著。在SNPC6位點

6、上，存在顯著的品種效應，在隱性白羽雞中不存在顯著的基因型效應；而在清遠麻雞中，GA型和AA型個體的剪切力值顯著高于GG型(P＜0.05)。在SNPC3的多態(tài)位點上，品種效應，基因型效應以及品種與基因型之間的互作效應均不顯著。
　　 不同品種、不同基因型的個體系水力值最小二乘分析結(jié)果表明：在SNPC5位點上，存在顯著的品種效應，在隱性白羽雞中存在顯著的基因型效應，AB型的系水力顯著高于BB型(P＜0.05)。在SNPC6和SNPC

7、3位點上均不存在顯著的品種效應、基因型效應以及品種與基因型之間的互作效應。(注：SNPC3、SNPC5、SNPC6分別代表CAPN1基因3′調(diào)控區(qū)、外顯子5、外顯子6的SNP位點，下面同。)
　　 3.CAPN1基因在雞不同生長階段表達規(guī)律研究。
　　 在清遠麻雞和隱性白羽雞的不同生長階段(0，2，4，6，8，10，12周齡)胸肌和腓腸肌組織中均檢測到了CAPN1基因的mRNA。在胸肌中，清遠麻雞CAPN1基因表達水平高

8、于隱性白羽雞，但兩個雞品種各時期發(fā)育性變化規(guī)律趨于一致，且表達高峰均出現(xiàn)在6周齡；而在腓腸肌中清遠麻雞2.5周齡以后的表達水平低于隱性白羽雞，2.5周齡以前略低于隱性白羽雞。兩個雞品種表達的變化趨勢顯示，以8周齡為分界線，8周齡以前兩者的表達水平呈現(xiàn)相反的變化趨勢，8周齡以后變化趨于一致，且清遠麻雞的表達高峰是在2周齡，而隱性白羽雞的表達高峰出現(xiàn)在6周齡。
　　 同一雞品種在不同組織的表達水平對比結(jié)果顯示，兩個雞品種的對比結(jié)果類