IBDV基因疫苗的制備及免疫效果的初步研究.pdf

1、傳染性法氏囊?。↖nfectious bursal disease，IBD）是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV)引起的雞和火雞的一種高度接觸性傳染病，對(duì)世界養(yǎng)禽業(yè)危害極大，接種疫苗是預(yù)防該病最有效的途徑。當(dāng)前通用的活疫苗有毒力返強(qiáng)的風(fēng)險(xiǎn)，而核酸疫苗則是將編碼某種抗原蛋白的外源基因直接導(dǎo)入到動(dòng)物體內(nèi)，表達(dá)抗原蛋白，并持續(xù)誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生對(duì)該抗原蛋白免疫應(yīng)答，因而更安全并得到了廣泛的

2、研究。VP2蛋白是IBDV的主要結(jié)構(gòu)蛋白又含有病毒的主要的抗原保護(hù)性位點(diǎn)，是理想的抗原蛋白，可作為DNA疫苗的首選基因。
　　 本研究參照IBDV(HuBei株)序列，使用PRIMER5.0軟件設(shè)計(jì)并合成引物，并在引物兩端兩個(gè)設(shè)計(jì)了酶切位點(diǎn)(NheI/HindⅢ)，通過聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增并克隆了IBDV(HuBei株)的VP2基因。然后將VP2插入真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)中，置于高效CMV啟動(dòng)子的調(diào)控之下，構(gòu)建

3、成DNA疫苗重組表達(dá)質(zhì)粒pc-VP2,并成功轉(zhuǎn)染HEK-293細(xì)胞，在轉(zhuǎn)染48小時(shí)后，進(jìn)行間接免疫熒光試驗(yàn)，篩選出陽性重組表達(dá)的質(zhì)粒。
　　 利用免疫重組質(zhì)粒pc-VP2及化學(xué)佐劑磷酸鈣配合分組免疫接種14日齡非免疫肉雞70只，隨機(jī)分為7組，每組10只，自由采食飲水。所有試驗(yàn)雞分別于首免后7，14，21，28天翅下靜脈采血，分離血清，ELISA法檢測(cè)血清抗體，并同時(shí)采集抗凝血，用于檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞增殖情況。結(jié)果顯示：含有VP2

4、基因免疫質(zhì)粒DNA與化學(xué)佐劑共同免疫組的血清ELISA抗體水平顯著高于空白組及空載體組(p＜0.05)，與其它各組差異不顯著，但略高于其它各組；各質(zhì)粒免疫組淋巴細(xì)胞增殖活性均高于空白對(duì)照組，G組（商品疫苗）的淋巴細(xì)胞在免疫后7天得到了有效的增殖，與其他各組差異顯著(P＜0.05)。攻毒試驗(yàn)結(jié)果表明：質(zhì)粒免疫組E組和F組與商品疫苗組保護(hù)率最高，達(dá)到70％，與對(duì)照組保護(hù)率(20％)差異極顯著(P＜0.01)。
　　 所有試驗(yàn)結(jié)果表明