豬鏈球菌2型IgA1 protease的鑒定及致病性研究.pdf

1、豬鏈球菌2型(Streptococcussuistypeserotype2,SS2)是一種重要的人畜共患病。目前對(duì)于SS2致病機(jī)理尚不太清楚，對(duì)其研究主要集中在毒力相關(guān)因子上，莢膜多糖是廣泛認(rèn)可的SS2毒力因子，已報(bào)道一些潛在的毒力因子也對(duì)豬鏈球菌的毒力有影響，因此，新的毒力因子的篩選與鑒定，對(duì)于探索豬鏈球菌的致病機(jī)制具有重要意義。
　　 分泌型免疫球蛋白A(ImmunoglobulinASecretory，SIgA)在呼吸道和

2、其它粘膜免疫系統(tǒng)中起著重要的防御作用，是粘膜應(yīng)答效應(yīng)中的主要效應(yīng)因子，在外分泌中SlgA含量多，又不容易被蛋白酶破壞，固成為抗感染以及抗過敏的一道重要屏障，且呼吸道SIgA中的SlgAl亞型約占90％。多種病原菌在與宿主長(zhǎng)期的共進(jìn)化中，已發(fā)展出多種方式拮抗宿主的粘膜免疫功能。例如，流感嗜血桿菌、腦膜炎奈瑟球菌、血鏈球菌、肺炎鏈球菌等病原微生物可通過IgAl蛋白酶(IgAlprotease)水解SIgA的鉸鏈區(qū)，將IgAl分解為完整的Fa

3、b和Fc片段且保留了它們的抗原特異性，失去Fc段的Fab段仍能識(shí)別和結(jié)合抗原、卻不能發(fā)揮Fc段的調(diào)理吞噬等功能，致使SlgA失去防御作用。IgAl蛋白酶也是這些病原微生物重要的毒力相關(guān)因子。
　　 通過對(duì)SS205ZYH33基因組的分析發(fā)現(xiàn)，其HP1022基因序列與肺炎鏈球菌的IgAlprotease具有一定的序列同源性。本實(shí)驗(yàn)重組的HP1022蛋白能識(shí)別和水解人的IgA1單克隆抗體，將IgA1分解為完整的Fab和Fc片段，即重

4、組HP1022蛋白具有IgAlprotease活性，且HP1022蛋白有良好的免疫學(xué)活性，即體內(nèi)表達(dá)，得出SS2表達(dá)此蛋白，即可證明HP1022是SS2的IgAlprotease。進(jìn)一步通過構(gòu)建HP1022基因缺失突變體(Δiga)并對(duì)其致病功能開展研究，發(fā)現(xiàn)與野生菌株相比，基因缺失菌株Δiga能夠穩(wěn)定遺傳，且其生長(zhǎng)特性和生化特性均無(wú)明顯改變，但粘附Hep-2細(xì)胞及抗吞噬的能力顯著下降，對(duì)仔豬和小鼠致病力明顯降低。通過對(duì)HP1022基因