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文檔簡介
1、本文以小麥品種YA-1幼胚為外植體,初步探討封口材質(zhì)對小麥幼胚培養(yǎng)的影響,并對小麥幼胚愈傷組織上直接再生的花芽生殖器官和不定根營養(yǎng)器官的α-微管蛋白基因結(jié)構(gòu)特異性進行研究,獲得主要結(jié)果如下:
1.在硅膠塞、棉塞兩不同封口材質(zhì)的再分化培養(yǎng)條件下,YA-1幼胚愈傷組織再分化的不定芽率、不定根率、褐化率存在極顯著差異(P<0.01)。再生不定芽率前者僅為19.21%,后者高達44.86%;不定根率前者顯著低于后者(19.69%<
2、39.90%);而褐化率前者則顯著高于后者(49.62%>8.37%)。
2.從小麥品種YA-1幼胚愈傷組織再生花芽和再生根器官,以及田間正常生長發(fā)育的幼穗1A染色體上擴增得到的cDNA開放閱讀框(ORF)F-1A、R-1A、S-1A的長度均為1353bp,序列相似性達到100%。根據(jù)它們的核苷酸序列推導出的氨基酸序列長度均含有450個氨基酸殘基,理論分子量均為50KD,等電點均為4.71。在其氨基酸序列的第142~148
3、位均存在一個微管蛋白信號片段GGGTGSG,C-端均有一酪氨酸殘基,N-端均具有MREⅡ序列。F-1A、R-1A、S-1A與已發(fā)表的T.aestivum‘Quantum’小麥的地上部營養(yǎng)器官的α-微管蛋白基因DQ435673的cDNA序列相似性達到99.41%,與之存在32個位點的堿基差異。
從上述材料的3B染色體上擴增得到的的cDNA開放閱讀框(ORF)F-3B、R-3B、S-3B的長度均為1356bp。根據(jù)它們的核苷酸
4、序列推導出的氨基酸序列長度均含有451個氨基酸殘基,理論分子量均為50KD。F-3B、S-3B等電點為4.65,R-3B等電點為4.70。在它們氨基酸序列的第142~148位都存在一個微管蛋白信號片段GGGTGSG,C-端均有一酪氨酸殘基,N-端均具有MRECⅠ序列。F-3B和S-3B均與已報道的Taestivum‘Quantum’小麥的地上部營養(yǎng)器官的α-微管蛋白基因DQ435662的序列相似性高達100%。而來自YA-1幼胚愈傷組織
5、再生不定根的R-3B則與F3B、S-3B和DQ435662均在第529位點上存在一個由G替換為A堿基的差異。
其1A和3B染色體上的α-微管蛋白基因的核苷酸之間的序列相似性因供試材料的器官性質(zhì)而異。其中,花芽生殖器官,無論是離體培養(yǎng)下的再生花芽,還是田間正常生長發(fā)育的幼穗,其cDNA的序列相似性均為84.69%,而克隆自營養(yǎng)器官不定根的相似性為80.68%。但參試三種材料在1A和3B染色體上的α-微管蛋白的氨基酸序列相似性
6、均為91.8%,其差異主要出現(xiàn)在第439位以后肽段。由此可見,小麥1A和3B染色體的α-微管蛋白基因及氨基酸序列結(jié)構(gòu)既存在同質(zhì)性,又存在異質(zhì)性,而在不同性質(zhì)的組織器官中,被測的兩個染色體上的α-微管蛋白基因及氨基酸序列結(jié)構(gòu)又具有高度的穩(wěn)定性,體現(xiàn)了α-微管蛋白基因高度的保守特性。
3.對比分析來自小麥的F-1A與已報道的玉米、水稻、大豆、棉花、擬南芥、斑馬魚、人類的α-微管蛋白基因氨基酸序列后發(fā)現(xiàn),F(xiàn)-1A與參比的7條序列
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