雞毒霉形體黏附素蛋白黏附特性及粘膜免疫研究.pdf

1、雞毒霉形體(Mycoplasmagallisepticum,MG)是引起禽類慢性呼吸道病(ChronicRespiratoryDisease,CRD)的病原，雖然不會引起雞群大量死亡，但是可導(dǎo)致雞群產(chǎn)蛋量下降、孵化率、飼料轉(zhuǎn)化率降低等，給養(yǎng)禽業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。
　　 目前該病的主要防治措施是接種疫苗，由于弱毒苗和滅活苗本身存在一些不足，因此新型基因疫苗的研制備受關(guān)注。研究表明，MG是借助其表面的黏附素蛋白(proteino

2、fMycoplsmagallisepticumAdhesin,pMGA)吸附到宿主細(xì)胞上，進(jìn)而發(fā)揮致病作用。pMGA是一種主要的原生質(zhì)膜蛋白，具有血凝素活性。本研究對實驗室保存的MG-HS株pMGA1.2基因進(jìn)行表達(dá)，經(jīng)western-blot檢測和體外氣管纖毛吸附試驗研究其免疫原性和黏附特性。采用原核表達(dá)的重組霍亂毒素B亞基(CholeratoxinBsubunit,CTB)(rCTB)作為粘膜免疫佐劑和pMGA1.2重組蛋白(rpM

3、GA1.2)一起免疫實驗動物，并對其免疫效果進(jìn)行了評價。主要試驗結(jié)果如下：
　　 1.MG黏附素蛋白基因(pMGA1.2)和霍亂毒素B亞基基因(ctb)的表達(dá)表達(dá)純化了rpMGA1.2和rCTB蛋白。經(jīng)SDS-PAGE電泳分析，其表達(dá)產(chǎn)物條帶大小均與預(yù)期的一致(rpMGA1.2約92.0Kda,rCTB約38.0KDa)，其中rpMGA1.2主要以可溶性蛋白的形式存在，而rCTB主要以包涵體的形式存在。經(jīng)Westernblot和

4、神經(jīng)節(jié)苷脂(GM1)結(jié)合試驗證明：rpMGA1.2和rCTB都具有良好的免疫學(xué)活性。
　　 2.雞毒霉形體黏附素蛋白pMGA1.2黏附特性研究雞胚氣管環(huán)在含10％犢牛血清的DMEM培養(yǎng)基中生長狀態(tài)良好，電鏡掃描結(jié)果顯示當(dāng)rpMGA1.2使用劑量為100μg時對MG導(dǎo)致的雞氣管纖毛脫落抑制作用最好，說明rpMGA1.2參與了MG的吸附過程。
　　 3.雞毒霉形體黏附素蛋白pMGA1.2粘膜免疫效果測定rpMGA1.2混合粘

5、膜免疫佐劑rCTB通過滴鼻點眼的途徑共同免疫試驗雞，ELISA結(jié)果表明：免疫后血清中能產(chǎn)生特異性的IgG及sIgA抗體，但是sIgA抗體水平較低；鼻沖洗液和氣管沖洗液中rCTB+rpMGA1.2組與rpMGA1.2組sIgA抗體水平差異顯著(P＜0.05),rCTB+rpMGA1.2不同劑量組(10μg,20μg)間差異不顯著，且鼻沖洗液中sIgA抗體水平較氣管沖洗液略高。攻毒試驗結(jié)果：rCTB+rpMGA1.210μg組效果較好，保護(hù)