塔形毛白楊CV-BJHR01再生體系的建立及Bt抗蟲基因工程的研究.pdf

1、楊樹是我國重要的生態(tài)防護林與工業(yè)用材樹種。但是楊樹蟲害嚴重,每年因蟲害造成了巨大的經(jīng)濟損失。隨著楊樹抗蟲基因工程的發(fā)展,一些重要的抗蟲基因,特別是歷基因,已經(jīng)成功用于楊樹病蟲害的防治,并取得了豐碩的成果。本研究以華北地區(qū)優(yōu)良的生產(chǎn)品種塔形毛白楊CV-BJHR01(Populus tomentosa Carr.cv‘BJHR01’)為受體材料,以經(jīng)改造的Bt886cry3Aa基因為目的抗蟲基因,經(jīng)過組培再生體系的建立、遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的驗證、

2、抗蟲基因的轉(zhuǎn)化等一系列研究,培育出表達Bt蛋白的轉(zhuǎn)基因毛白楊新品系。具體取得以下結(jié)果:
　　 (1)對培養(yǎng)基配方、培養(yǎng)條件以及外植體類型進行探索,建立并優(yōu)化了塔形毛白楊CV-BJHR01的組培再生體系。這對于優(yōu)良品種的推廣和種質(zhì)資源的保存具有重要意義,同時為基因工程育種奠定基礎(chǔ),也為促進農(nóng)林復(fù)合生態(tài)系統(tǒng)的健康發(fā)展提供了科技支撐。
　　 (2)通過對gus基因的瞬時表達檢測,建立并驗證了整個遺傳轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的可行性。同時對轉(zhuǎn)化

3、體的抗性篩選壓進行了摸索,確定了最適的抗生素篩選濃度,為抗蟲基因的順利轉(zhuǎn)化奠定了基礎(chǔ)。
　　 (3)通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化,將目的基因轉(zhuǎn)入了塔形毛白楊CV-BJHR01的基因組中,PCR檢測確定64株為轉(zhuǎn)基因陽性植株。PCR-Southern雜交進一步驗證了PCR檢測結(jié)果。利用mBt-Cry3A ImmunoStrip檢驗?zāi)康目瓜x基因在植物體內(nèi)是否有蛋白表達,結(jié)果表明：64株P(guān)CR陽性植株中有12株呈蛋白陽性反應(yīng),以mBt-C