RESISTIN對炎癥信號途徑的調控研究.pdf

1、Resistin稱抗素(也稱FIZZ3),是一種含有114個氨基酸的細胞因子。近來發(fā)現(xiàn)resistin具有一系列前炎癥因子的特征,在炎癥中能夠誘導血管內皮細胞粘附分子的表達,從而導致白細胞向各個炎癥組織中的浸潤。盡管resistin在炎癥發(fā)生中已有不少報道,但其與經典炎癥信號途徑的關系,在炎癥中的作用及其調控機制尚未闡明。
　　 環(huán)氧合酶2(COX-2)是前列腺素合成中的一個限速酶。在人體中存在兩種不同的COX異構體,分別稱為C

2、OX-1和COX-2。其中COX-2是一種經過誘導而產生的酶,在正常生理條件下維持較低的表達水平,但在炎癥部位表達上調,催化炎性PGs的合成并誘發(fā)炎癥反應。此外,COX-2的啟動子上存在NF-kB的結合元件,可受轉錄因子NF-kB調控。一些重要的炎癥因子例如TNF-α和IL-1可通過激活NF-kB而上調COX-2的表達。
　　 本研究以resistin為研究對象,采用real-time PCR、Western Blotting和

3、細胞轉染等技術,系統(tǒng)研究了resistin通過經典的炎癥信號途徑上調COX-2的基因表達及抗炎肽C15對resistin等引起的炎癥反應的抑制作用分子機制,結果如下:
　　 1.在巨噬細胞內分別轉染豬和小鼠resistin的超表達載體,采用real-timePCR和Western Blotting方法檢測細胞內源的COX-2的mRNA和蛋白質水平的表達變化。結果表明,resistin在RAW264.7巨噬細胞系中可以顯著地上調C

4、OX-2的mRNA和蛋白質的表達。更重要的是,通過原核表達制備了抗resistin的抗體,用抗體處理可以抵消resistin的這種作用。
　　 2.以巨噬細胞為模型,通過負顯性IkBα突變體和PDTC這兩種抑制物質研究了resistin對COX-2的信號轉導途徑的調控。結果表明,無論是超表達負顯性Ird3α突變體載體,還是用抑制劑PDTC刺激,都可以抑制resistin對COX-2的誘導作用。進一步的研究證實,resistin的

5、超表達可以上調NF-kB分子中的p65亞基的表達,進而誘導COX-2的表達水平的上升。
　　 3.以resistin對小鼠巨噬細胞作不同時間梯度的處理,用Western Blotting方法分析resistin對一種MAPKKK激酶TAK1(Transforming growth factorβactivatedkinase1)的磷酸化程度的影響。結果表明,resistin可以顯著上調TAK1的磷酸化水平。
　　 4.以

6、促炎物質resistin,LPS,PA分別和C15共同處理小鼠巨噬細胞,檢測炎癥基因COX-2和iNOS(inducible nitric oxide synthase)的表達變化。結果表明,炎癥基因COX-2和iNOS可以被三種促炎物質誘導表達,并且這種誘導的情況可以顯著被C15所抑制住。
　　 5.在巨噬細胞中,以LPS在不同時間梯度刺激細胞,用細胞免疫熒光的方法檢測NF-kB的p65亞基的入核情況。結果證實,C15可以明顯