AMPK-PPARα-SCAD信號途徑對心肌肥大的調(diào)控研究.pdf

1、目的：研究短鏈?；o酶A脫氫酶（short-chain acly-coenzyme A dehydrogenase，SCAD）在心肌肥大中的作用及腺苷酸活化蛋白激酶（adenosine monophosphate activated protein kinase，AMPK）/過氧化物酶體增殖劑活化受體α（peroxisome proliferator-activated receptorα，PPARα）對SCAD的調(diào)控。
　　方法

2、：(1)使用Western-blot、RT-PCR和酶活性測定的方法，檢測干擾序列干擾后短鏈?；o酶A脫氫酶（SCAD）的表達(dá)和酶活性變化，篩選干擾SCAD的最優(yōu)干擾序列，檢測最優(yōu)干擾序列1186刺激的心肌細(xì)胞中SCAD的表達(dá)量和活性的改變，同時檢測肥大相關(guān)基因心房利鈉因子（ANF）和腦利鈉肽（BNP）的mRNA變化及脂質(zhì)代謝和心肌細(xì)胞表面積的改變，并與苯腎上腺素誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大模型相比較。
　　(2)檢測在提前24小時給予PP

3、ARα受體激動劑非諾貝特（10μmol/L）后敲低SCAD的心肌細(xì)胞肥大模型中SCAD和過氧化物酶體增殖劑活化受體α（PPARα）的表達(dá)量改變，心肌細(xì)胞SCAD的酶活性變化，同時檢測肥大相關(guān)基因ANF和BNP的mRNA變化及脂質(zhì)代謝和心肌細(xì)胞表面積的改變。分別對PE刺激24小時的心肌細(xì)胞肥大模型組和非諾貝特提前30min預(yù)處理后PE刺激24小時的心肌細(xì)胞模型組，測定其心肌細(xì)胞表面積變化、心肌細(xì)胞游離脂肪酸的含量、心肌細(xì)胞SCAD的酶活性

4、變化、SCAD和PPARα的表達(dá)量及肥大相關(guān)基因ANF和BNP的mRNA變化。
　　(3)分別對PE刺激24小時的心肌細(xì)胞大模型組和AMPK激活劑AICAR（0.5mmol/L）提前30min預(yù)處理后PE刺激24小時的心肌細(xì)胞模型組，測定其心肌細(xì)胞表面積的變化、心肌細(xì)胞游離脂肪酸的含量、心肌細(xì)胞SCAD的酶活性變化、相關(guān)心肌肥大標(biāo)志基因 ANF、BNP的mRNA變化和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶α（p-AMPKα）、SCAD、PPAR

5、α的表達(dá)量變化。
　　結(jié)果：(1)與對照組相比，1186干擾序列組的SCAD蛋白、mRNA表達(dá)水平顯著下降，SCAD的酶活性明顯降低，心肌細(xì)胞的游離脂肪酸含量增加，心肌肥大標(biāo)志基因ANF和BNP的mRNA水平明顯上升，心肌細(xì)胞表面積也顯著增加，心肌細(xì)胞肥大的程度與PE誘導(dǎo)心肌肥大所致的趨勢一致。
　　(2)提前24小時給予非諾貝特后敲低SCAD的心肌細(xì)胞肥大模型中，SCAD、PPARα的表達(dá)量明顯上升，SCAD的酶活性也出現(xiàn)

6、增強(qiáng)的趨勢，心肌細(xì)胞的游離脂肪酸含量減少，肥大相關(guān)基因ANF和BNP的mRNA水平明顯下降，心肌細(xì)胞表面積也明顯減少。與對照組比較，PE刺激24小時后，心肌細(xì)胞表面積明顯增大、心肌細(xì)胞游離脂肪酸含量明顯增多、心肌細(xì)胞SCAD的活性明顯降低、ANF和BNP的mRNA表達(dá)水平明顯增加，p-AMPKα、SCAD、PPARα的表達(dá)量明顯減少。
　　(3)與PE組比較，用非諾貝特或AICAR后，心肌細(xì)胞未出現(xiàn)肥大、心肌細(xì)胞游離脂肪酸含量明顯

7、減少、心肌細(xì)胞SCAD的酶活性顯著增強(qiáng)、ANF和BNP的mRNA表達(dá)水平明顯降低、p-AMPKα、SCAD、PPARα的表達(dá)量明顯增加。
　　結(jié)論：(1)心肌肥大時SCAD的蛋白和mRNA水平明顯下降，敲低SCAD后心肌細(xì)胞出現(xiàn)明顯肥大，表明SCAD的下調(diào)與心肌肥大密切相關(guān)。
　　(2) PPARα的變化趨勢與SCAD一致，非諾貝特可以上調(diào)SCAD的表達(dá)，增強(qiáng)心肌細(xì)胞內(nèi)SCAD酶活性，逆轉(zhuǎn)敲低SCAD和PE誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞肥大