腸炎沙門氏菌對雞細胞自噬的影響及其Fe3O4--MNP調控作用研究.pdf

1、本試驗旨在從細胞自噬角度研究四氧化三鐵磁性納米粒子(Fe3O4 Magnetic Nanoparticles，F(xiàn)e3O4-MNP)對禽源細胞腸炎沙門氏菌（Salmonella enteritidis，SE）感染結局的調控作用。
　　試驗一:腸炎沙門氏菌感染誘導LMH細胞自噬的研究。選擇雞肝癌細胞（LMH細胞）為研究對象，構建了SE感染模型。于感染后24 h(24 hours post infection，24 hpi)收集細胞，以

2、透射電鏡(Transmission electron microscope，TEM)和Western-blot(WB)方法檢測自噬的發(fā)生情況，結果表明:SE SC070株感染條件為感染劑量5×107cfu/mL、感染時間1h時，大部分LMH細胞都有SE侵入，而細胞狀態(tài)不受太大影響，未出現(xiàn)細胞質松散或細胞崩解;TEM結果顯示，SE感染組LMH細胞內可見大量包裹SE的的自噬結構，而對照組LMH細胞內未見明顯自噬結構;WB結果顯示SE感染組L

3、C3-Ⅱ/β-actin比值顯著高于對照組（P＜0.05），p62/β-actin比值極顯著低于對照組（P＜0.01）。
　　試驗二:Fe3O4-MNP對腸炎沙門氏菌的調控作用。在SE SC070株感染LMH細胞后，添加不同劑量（50、100、200、400μg/mL）的Fe3O4-MNP進行處理，同時設置不添加Fe3O4-MNP處理的對照組。于感染后不同時間點收集LMH細胞，通過CCK-8法檢測細胞活性，平板計數(shù)法計數(shù)胞內菌數(shù)量

4、。結果顯示:6 hpi時，與對照組相比，各劑量的Fe3O4-MNP處理均對胞內菌數(shù)量無顯著影響（P＞0.05），200μg/mL和400μg/mL兩組顯著降低了細胞活性(P＜0.05);12 hpi時，與對照組相比，各劑量的Fe3O4-MNP處理均極顯著降低了胞內菌數(shù)量(P＜0.01)，100μg/mL組有增加細胞活性的趨勢(P＞005)，50μg/mL和200μg/mL兩組對細胞活性無顯著影響(P＞0.05)，400μg/mL組顯著抑

5、制了細胞活性(P＜0.05);18 hpi時，與對照組相比，各劑量Fe3O4-MNP均極顯著降低了胞內菌數(shù)量(P＜0.01)，50μg/mL組對細胞活性無顯著影響(P＞0.05)，而100、200和400μg/mL三組均極顯著降低了細胞活性(P＜0.01);24hpi時，與對照組相比，各劑量Fe3O4-NPs均極顯著降低了胞內菌數(shù)量和細胞活性(P＜0.01)，且劑量為400μg/mL時最低;30hpi時，與對照組相比，各劑量Fe3O4-

6、MNP均極顯著降低了胞內菌數(shù)量和細胞活性(P＜0.01)，且劑量越大，胞內菌數(shù)量越少，細胞活性越弱。
　　試驗三:自噬在Fe3O4-MNP調控腸炎沙門氏菌感染中的作用研究。在SE SC070株感染LMH細胞后，添加100μg/mL的Fe3O4-MNP進行處理（SN組），同時設置不添加Fe3O4-MNP處理的對照組（SE組）。于12 hpi收集細胞，以TEM和WB方法檢測自噬的發(fā)生情況，結果表明:WB結果顯示SN組LC3-Ⅱ/β-a

7、ctin比值顯著高于SE組(P＜0.05)，p62/β-actin比值顯著低于SE組（P＜0.05）;TEM結果顯示，與SE組相比，SN組胞漿內除了可見包裹SE的自噬結構外，還可見包裹SE和Fe3O4-MNP的自噬結構。
　　綜上所述:本試驗中SE感染模型構建的合適條件為:感染劑量為5×107 cfu/mL，細菌和細胞共培養(yǎng)1 h;SE感染能夠誘導禽源細胞LMH發(fā)生自噬。Fe3O4-MNP能夠緩解LMH細胞SE感染，且劑量為100