鼠傷寒沙門氏菌spvB基因對宿主細胞自噬的影響及其分子機制的研究.pdf

1、分類號： 密級：U D C ： 學號：406520615055南 昌 大 學 碩 士 研 究 生學 位 論 文鼠傷寒沙門氏菌 鼠傷寒沙門氏菌 spvB 基因對宿主細胞自噬的影響 基因對宿主細胞自噬的影響及其分子機制的研究 及其分子機制的研究Effects of spvB gene in Salmonella typhimurium on autophagy of hostcells and its molecular mechanism

2、賴華毅 賴華毅培養(yǎng)單位（院、系）：江西省兒童醫(yī)院指導教師姓名、職稱：陳強 教授 主任醫(yī)師申請學位的學科門類：醫(yī)學學科專業(yè)名稱：兒科學論文答辯日期： 2018 年 6 月答辯委員會主席： 吳星恒評閱人： 陳曉劉燕玲2018 年 6 月摘要II摘 要目的： 目的：鼠傷寒沙門菌 spv 基因是沙門菌感染中重要的致病因子。spv 含有三個必需基因：正性轉錄調控基因 spvR 和兩個結構基因 spvB 和 spvC。本研究通過建立鼠傷寒沙門氏菌感

3、染人腸黏膜上皮細胞的模型，觀察下調 spvB 基因表達后，對于細胞自噬、自噬相關蛋白的影響，并探討 p38MAPK 信號通路在鼠傷寒沙門菌 spvB 基因影響腸上皮細胞自噬中的作用，為沙門菌感染的臨床治療提供新的研究思路和靶點，為進一步研究耐藥及非耐藥沙門菌株中 spvB 對自噬影響的差異及其分子機制奠定基礎。方法： 方法：一、鼠傷寒沙門菌 spvB 基因對于腸黏膜上皮細胞自噬的影響。分別使用攜帶 spvB 基因的鼠傷寒沙門氏菌野生株

4、STM-211、敲除 spvB 基因的鼠傷寒沙門氏菌突變株 STM-ΔspvB 和回補株 STM-c-spvB 與處于生長對數(shù)期的腸黏膜上皮細胞 Henle-407 細胞進行共培養(yǎng)，再使用透射電子顯微鏡(transmission electron microscope，TEM)觀察細胞的超微結構；單丹磺酰尸胺(monodansylcadaverin, MDC)染色后鏡下觀察；稀釋涂板作胞內細菌計數(shù)；免疫印跡法(Western Blot，

5、WB)檢測自噬相關蛋白 LC3 和 p62 的表達，并比較各感染組和對照組之間的自噬強度是否相同。二、鼠傷寒沙門菌 spvB 基因在影響 Henle-407 細胞自噬中 p38MAPK 信號通路的作用。在原有的感染模型基礎上增加 p38MAPK 通路抑制劑 SB203580 進行干預對照。于共培養(yǎng)后的 1h 和 3h 收集細胞，通過免疫印跡法檢測 p38 的磷酸化水平和自噬標志蛋白 LC3、p62 的表達水平；免疫熒光染色觀察自噬蛋白