小腸上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞在抵抗鼠傷寒沙門氏菌感染中的作用及機制探討.pdf

1、目的：
　　 腸道免疫系統(tǒng)對于維持腸道粘膜的穩(wěn)態(tài)發(fā)揮著重要作用，它既要保護機體免受病原菌的入侵，又要對腸道中的共生菌保持耐受，其區(qū)分共生菌群和致病微生物的機制至今仍未得到闡明。腸道上皮內(nèi)淋巴細(xì)胞(iIELs)鑲嵌在腸道上皮細(xì)胞間，對粘膜免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)起著重要作用。iIELs被認(rèn)為是一群高度活化的大顆粒淋巴細(xì)胞，可以迅速地對早期感染產(chǎn)生免疫應(yīng)答。
　　 本研究選用一種腸道致病菌鼠傷寒沙門氏菌，觀察小鼠經(jīng)口感染后其iIELs

2、不同亞群的表型變化，并以腸道共生菌之一大腸桿菌為對照，探究在致病菌感染過程中發(fā)揮主要抵抗作用的iIELs亞群，并探討其抗感染的機制，以便于進一步研究在腸道感染過程中免疫應(yīng)答及免疫病理的發(fā)生機制，進而為腸道感染及腫瘤等疾病的治療提供新的策略和思路。
　　 方法：
　　 1．小鼠灌胃感染鼠傷寒沙門氏菌，建立腸道感染模型，HE染色檢測傷寒感染后小腸粘膜形態(tài)變化。
　　 2．MTT法檢測傷寒感染后iIELs對鼠T淋巴瘤細(xì)

3、胞系YAC-1、鼠結(jié)直腸癌細(xì)胞系MCA-38及鼠小腸上皮細(xì)胞(IECs)殺傷能力的變化。
　　 3．RT-PCR檢測傷寒感染后iIELs殺傷相關(guān)分子基因水平的表達變化；Real-Time PCR檢測傷寒感染后小腸上皮細(xì)胞Qa-1及NKG2D相關(guān)配體基因水平表達的變化。
　　 4．小鼠體內(nèi)阻斷NKG2D后檢測小腸組織中傷寒菌的負(fù)載量。
　　 5．流式細(xì)胞術(shù)檢測傷寒感染后iIELs各亞群及IECs的表型變化。

4、　　 6．免疫磁珠法分選CD8+TCRγδ+iIELs亞群，檢測傷寒感染后該亞群的表型和殺傷功能的變化。
　　 7．小鼠體內(nèi)清除γδT細(xì)胞后檢測肝、脾、小腸及派氏結(jié)中傷寒菌的負(fù)載量。
　　 結(jié)果：
　　 1．鼠傷寒沙門氏菌經(jīng)口感染可引起小鼠腸炎；
　　 2．鼠傷寒沙門氏菌感染時CD8+TCRγδ+iIELs亞群的比例增加，iIELs對腫瘤細(xì)胞及感染的腸上皮細(xì)胞殺傷活性增強；
　　 3．鼠傷寒沙門

5、氏菌感染可致CD8+TCRγδ+iIELs亞群表面NKG2D的表達增強；
　　 4．鼠傷寒沙門氏菌感染可致IECs表面MULT1表達增強；
　　 5．體內(nèi)阻斷NKG2D增加了傷寒菌在小腸中的負(fù)載量；
　　 6．體內(nèi)清除γδT細(xì)胞加劇了傷寒菌對機體的侵襲；
　　 7．鼠傷寒沙門氏菌感染降低了IECs表面Qa-1b的表達水平；
　　 8．小鼠iIELs對共生菌經(jīng)口感染保持耐受狀態(tài)；
　　 9．

6、Nod1可能參與IECs對傷寒菌的識別。
　　 結(jié)論：
　　 1．iIELs，尤其是CD8+TCRγδ+iIELs亞群，在小腸抵抗鼠傷寒沙門氏菌感染中發(fā)揮重要作用；
　　 2．傷寒感染時CD8+TCRγδ+iIELs亞群表面NKG2D表達增強，腸上皮細(xì)胞NKG2D配體MULT-1表達增強，而抑制性配體Qa-1b表達下降，導(dǎo)致活化性信號和抑制性信號平衡的失調(diào)；
　　 3．NKG2D及其配體的相互識別參與了C