豬CACNA1S基因的研究.pdf

1、鈣離子通道是由多個亞單位組成的多基因家族復合體，參與機體代謝，具有重要的生理功能；其中α；亞單位作為電壓感受器，具有離子選擇性，能為鈣拮抗劑等多數藥物提供結合位點并形成跨膜的親水通道，是最重要的亞單位，其編碼基因(CACNA1S)突變會導致人低鉀性周期性麻痹和惡性高溫綜合征。人的CACNA1S基因被定位在1號染色體(1q31-32)，而對于豬和其它動物尚未見報道。應用輻射雜種細胞系(RH panel)進行基因定位是繼熒光原位雜交技術(F

2、ISH)后新近發(fā)展起來的一種有效的基因定位方法；該法簡便易行，結果直觀，能快速準確地提供可靠的基因定位信息。本研究根據人CACNA15基因3'端非翻譯區(qū)序列設計引物，對豬基因組DNA進行PCR擴增、測序，與人相應序列作同源性比較；然后采用IMpRHpanel將CACNA1S基因定位于豬10p11-12。 本實驗根據人CACNA1S基因序列設計引物，通過RT-PCR和跨內含子擴增等方法得到豬CACNA1S基因約5380 bp序列，

3、其中外顯子部分為2000 bp，內含子部分約3380bp，經與人該基因相應部分外顯子序列比較，同源性為64.6％-97.4％。運用PCR-SSCP技術對其中3045 bp的DNA序列進行單核苷酸多態(tài)性檢測，結果發(fā)現56個SNP突變點，其中外顯子序列(1342bp)25個，內含子序列(1703 bp)31個。在10個檢測片斷中：由引物對1S-47和1S-73所擴增片斷未檢測到多態(tài)SNP位點；其余引物對擴增片斷均具有較好的多態(tài)性；根據三個多

4、態(tài)的SNP's位點，設計了三個PCR-RFLP檢測方法，并進行了基因型檢測。 采用一般線性模型法分析了各基因位點對豬胴體性狀及肉質性狀的遺傳效應，結果顯示：位點1S-46對系水力存在極顯著的影響(P<0.01)，對肉色(L)、眼肌面積存在顯著的影響(0.01

5、D基因型，BD基因型顯著性地大于DD基因型， BB基因型對眼肌面積的影響顯著地大于BC、CC、DD基因型，CD基因型顯著地大于DD基因型；位點1S-74對后腿重、背膘厚(中)和系水力均存在極顯著的影響(P<0.01)，對頭重的影響也較大；其中AA、AB基因型對后腿重的影響顯著地大于AE基因型，AC基因型對背膘厚(中)的影響顯著地大于AA、AB、AD、AE基因型，AC、AD、AE基因型對系水力的影響顯著地大于AB基因型。位點1S-61對后

6、腿重存在極顯著的影響(P<0.01)，對活重的影響較大：其中AB基因型對后腿重的影響顯著性地大于BC、CC基因型，AA基因型顯著性地大于BB基因型。位點1S-64對大腿溫度存在極顯著性的影響(P<0.01)，對眼肌溫度存在顯著性影響(0.01

7、P<0.05)，其中AA基因型顯著性地大于AB、AC、BB基因型。位點1S-72對后腿重存在極顯著性的影響(P<0.01)，對后腿肌肉重和背膘厚(前)影響較大；其中DD基因型對后腿重的影響顯著性地大于AA基因型，AA、AB基因型顯著性大于CC基因型：對后腿肌肉重的影響以DD基因型顯著性大于AA基因型，對背膘厚(前)的影響以BB基因型顯著性地大于CC基因型，DD基因型顯著性的大于AA、CC基因型。酶切位點Ec072 I對后腿肌肉重和肉色(