仔豬胃腸道中FcRn表達(dá)的定量檢測(cè)及基因片段分析.pdf

1、為了探索FcRn在出生至斷奶后仔豬肝臟和胃腸道組織中的表達(dá)規(guī)律及其與仔豬腸道IgG轉(zhuǎn)運(yùn)的相關(guān)性，本文以長(zhǎng)白雜交二元仔豬為研究對(duì)象，對(duì)豬FcRn基因進(jìn)行克隆與序列分析，并采用RT-PCR法對(duì)不同日齡二元仔豬胃腸道中FcRn水平進(jìn)行了定量檢測(cè)。主要結(jié)果如下： 1．豬FcRn基因的克隆與序列分析：提取十二指腸組織總RNA，利用Primer 5．0引物設(shè)計(jì)軟件設(shè)計(jì)一對(duì)PCR引物，然后利用設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行RT-PCR，PCR產(chǎn)物與pMD-1

2、9T載體連接后轉(zhuǎn)化JM109感受態(tài)細(xì)胞，篩選陽(yáng)性克隆并測(cè)序；FcRn陽(yáng)性克隆兩條序列在NCBI上比較，顯示序列同豬FcRn （AY740682．1）同源性都為99％?？寺×素iFcRn基因的序列和其剪接變體序列，其剪接變體序列已在GenBank上注冊(cè)（Accession． EU852582）。 2．仔豬胃腸道組織FcRn mRNA的定量檢測(cè)：根據(jù)GenBank公布的豬FcRn重鏈mRNA基因保守序列自行設(shè)計(jì)PCR引物和熒光探針，并

3、以β-actin為管家基因，對(duì)仔豬胃腸道組織中FcRn的表達(dá)進(jìn)行了定量檢測(cè)。結(jié)果表明，F(xiàn)cRn mRNA表達(dá)量隨日齡的變化規(guī)律為：出生當(dāng)天表達(dá)水平較低，未吃初乳（0 w）和已吃初乳（0 y）沒(méi)有顯著差異（P>0．05）；1d時(shí)表達(dá)水平顯著升高（P<0．05），隨后維持在較穩(wěn)定的水平直至21 d時(shí)有所下降；28 d時(shí)FcRn在胃腸道各部位表達(dá)均有顯著升高（P<0．05）；35 d時(shí)則普遍回落到與前期相近的水平。FcRn在仔豬胃腸道組織中平