丁酸鈉處理對(duì)奶牛成纖維細(xì)胞周期、活性、凋亡和組蛋白乙?；挠绊?pdf

1、體細(xì)胞核移植技術(shù)是動(dòng)物胚胎工程中一種比較重要的技術(shù),對(duì)于體外胚胎的大量生產(chǎn)具有十分重要的意義,但是就目前的發(fā)展?fàn)顩r來(lái)看,這項(xiàng)技術(shù)的成功率還比較低,不能用于實(shí)際的生產(chǎn)。其中造成這樣的結(jié)果的一個(gè)比較重要的因?yàn)榫褪枪w細(xì)胞核的不完全重編程。所以本實(shí)驗(yàn)從供體組蛋白乙?；胧?研究組蛋白乙酰化對(duì)于重編程的影響。針對(duì)以上的問(wèn)題,本實(shí)驗(yàn)以第6代牛胎兒成纖維細(xì)胞作為供體細(xì)胞,以牛卵母細(xì)胞作為受體進(jìn)行研究,得到如下結(jié)果與結(jié)論:
　　 1.用3 m

2、mol/L丁酸鈉(NaBu)分別處理供體細(xì)胞0、48和72、96h,通過(guò)核移植檢測(cè)克隆胚胎發(fā)育率,并應(yīng)用激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測(cè)處理之后的細(xì)胞的組蛋白H3K9、14乙?；?。結(jié)果顯示:隨著NaBu處理時(shí)間的延長(zhǎng),供體細(xì)胞組蛋白H3K9、14乙?；讲粩嘣龈?；用NaBu處理之后的成纖維細(xì)胞就行核移植,以3mmol/L NaBu處理供體細(xì)胞48h的克隆胚的囊胚發(fā)育率顯著高于未處理組(32.5％vs22％,p<0.05)。結(jié)論:3 mmo

3、l/LNaBu處理供體細(xì)胞48h更易使重編程的過(guò)程發(fā)生,顯著提高了克隆胚的體外發(fā)育能力,初步證實(shí)NaBu是通過(guò)提高供體細(xì)胞組蛋白乙?；絹?lái)促進(jìn)供體細(xì)胞重編程。
　　 2.采用組蛋白乙酰化酶抑制劑(NaBu)處理成纖維細(xì)胞,除了其對(duì)細(xì)胞組蛋白乙?；杏绊懼?考慮其對(duì)細(xì)胞特性的一些影響。嘗試著確定NaBu的最佳處理濃度和最佳處理時(shí)間,使其既不影響體細(xì)胞生物學(xué)特性,又可提高供體細(xì)胞組蛋白乙?；癄顟B(tài)的方法,從而提供一種提高體細(xì)胞克隆

4、動(dòng)物效率的方法。實(shí)驗(yàn)中用NaBu分別處理奶牛成纖維細(xì)胞0、48、72、96h,采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡的情況,用MTT法檢測(cè)NaBu對(duì)成纖維細(xì)胞活性的影響。結(jié)果顯示:處理組細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了改變,不規(guī)則生長(zhǎng),細(xì)胞之間接觸不緊密,還出現(xiàn)脫壁死亡的現(xiàn)象。經(jīng)3 mmol/LNaBu處理的細(xì)胞在G0/G1期的百分比與未經(jīng)處理的對(duì)照組相比略有降低；從瓊脂糖凝膠電泳圖譜上可見從72h開始出現(xiàn)拖帶現(xiàn)象,說(shuō)明細(xì)胞的DNA開始有斷裂。用Annex