牛IL-2和IFN-γ對(duì)Asia1型口蹄疫病毒G-H環(huán)多肽免疫效果的影響.pdf

1、口蹄疫(Foot and mouth disease, FMD）是由口蹄疫病毒(FMD virus, FMDV)所致的一種偶蹄動(dòng)物共患的急性、熱性、高度接觸性傳染病，該病的暴發(fā)會(huì)給國(guó)家?guī)?lái)巨大的經(jīng)濟(jì)和政治影響。傳統(tǒng)疫苗在該病的防治過(guò)程中雖然起著舉足輕重的作用，但其本身產(chǎn)生的副作用使得安全高效新型FMD疫苗的研制成為了必要。目前，最常見(jiàn)的新型FMD疫苗是生物合成多肽疫苗。多肽疫苗具有安全穩(wěn)定、易于生產(chǎn)、針對(duì)性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)，但免疫原性一般較差。

2、因此，使用多肽疫苗進(jìn)行免疫時(shí)加入合適的佐劑是必不可少的。本研究從細(xì)胞因子佐劑的研究出發(fā)，將牛IL-2、IFN-γ真核表達(dá)質(zhì)粒和牛IFN-γ成熟蛋白（pr-mBoIFN-γ）分別同Asia1型FMDV G-H環(huán)多肽（FMDV VP1蛋白137-158aa）融合蛋白聯(lián)合免疫小鼠，觀察重組牛IL-2和IFN-γ對(duì)FMDV G-H環(huán)多肽免疫效果的影響。
　　 本研究對(duì)G-H環(huán)多肽融合蛋白（G-H）及pr-mBoIFN-γ進(jìn)行了原核表達(dá)并

3、純化，構(gòu)建了含有信號(hào)肽序列的牛IL-2和牛IFN-γ真核表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1-pBoIL-2和pcDNA3.1-pBoIFN-γ。為了檢測(cè)構(gòu)建的真核表達(dá)質(zhì)粒是否能在哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)正常表達(dá)，將兩種質(zhì)粒和空載體pcDNA3.1分別轉(zhuǎn)染BHK21細(xì)胞并利用間接免疫熒光試驗(yàn)體外鑒定其表達(dá)。結(jié)果顯示，pcDNA3.1-pBoIL-2和pcDNA3.1-pBoIFN-γ轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞出現(xiàn)了明亮的綠色熒光，而空載體轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞則沒(méi)有熒光出現(xiàn)，這說(shuō)明

4、真核表達(dá)質(zhì)粒 pcDNA3.1-pBoIL-2和pcDNA3.1-pBoIFN-γ在BHK21細(xì)胞中進(jìn)行了成功表達(dá)。將兩種細(xì)胞因子的真核表達(dá)質(zhì)粒和pr-mBoIFN-γ分別與G-H組合免疫昆明鼠，并設(shè)立陰陽(yáng)性對(duì)照。用間接ELISA試驗(yàn)和病毒中和試驗(yàn) (Virus Neutralization Test, VNT) 檢測(cè)免疫鼠的體液免疫狀況。結(jié)果顯示，首次免疫后各組小鼠血清抗體增長(zhǎng)不明顯；第2次、第3次免疫后陰性對(duì)照PBS免疫組和G-H+

5、pcDNA3.1免疫組的抗體水平?jīng)]有明顯變化，而G-H+pcDNA3.1-pBoIFN-γ免疫組、G-H+pr-mBoIFN-γ免疫組和G-H+pcDNA3.1-pBoIL-2免疫組的抗體水平顯著高于陰性對(duì)照組卻又顯著低于滅活疫苗免疫組(P<0.05)。此外，G-H+pcDNA3.1-pBoIL-2、G-H+pcDNA3.1-pBoIFN-γ免疫組中和抗體滴度 (neutralizing antibody titer, NAT)顯著高于

6、G-H＋FA免疫組，表明與弗氏佐劑比較，細(xì)胞因子分子佐劑在免疫中會(huì)起到更為顯著的效果。淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果表明，首次免疫后35天，G-H+pcDNA3.1-pBoIFN-γ免疫組小鼠淋巴細(xì)胞顯示出了最高的增殖水平，其次是G-H+pcDNA3.1-pBoIL-2免疫組和G-H+Pr-mBoIFN-γ免疫組，三者的淋巴細(xì)胞增殖水平均顯著高于G-H+pcDNA3.1免疫組和PBS免疫組。細(xì)胞因子檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果顯示，所有免疫組中，滅活疫苗免疫組誘

7、導(dǎo)了最高水平的IL-4，G-H+Pr-mBoIFN-γ免疫組誘導(dǎo)了最高水平的IFN-γ，這與抗體檢測(cè)試驗(yàn)和淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果是一致的。而與G-H+pcDNA3.1免疫組比較，G-H+pcDNA3.1-pBoIL-2、pcDNA3.1-pBoIFN-γ和G-H+pr-mBoIFN-γ免疫組無(wú)論是IL-4的相對(duì)表達(dá)水平還是IFN-γ的相對(duì)表達(dá)水平均有顯著的提高，進(jìn)一步說(shuō)明rBoIL-2和rBoIFN-γ對(duì)G-H免疫小鼠產(chǎn)生的體液免疫和