TCDD或3-MC對(duì)斑馬魚EROD酶活性及Cyp1a mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、二噁英類化合物(Dioxin-like compounds，DLCs)是高度脂溶性的環(huán)境污染物，由土壤、水或飼料轉(zhuǎn)入食物鏈，具有致死作用與廢物綜合征、氯痤瘡、肝毒性、發(fā)育毒性、生殖毒性、致畸性、致癌性、免疫毒性和內(nèi)分泌紊亂等多種毒性作用。魚類CYP1A的誘導(dǎo)可被作為機(jī)體暴露于二噁英類化合物(Dioxin-like compounds，DLCs)的早期預(yù)警信號(hào)及高度敏感的生物反應(yīng)，而7-乙氧基-異吩噁唑酮-脫乙基酶(7-ethoxyres

2、oufin-O-deethylase，EROD)是細(xì)胞色素P4501A1(Cytochrome P4501A1，CYP1A1)介導(dǎo)的單加氧酶系統(tǒng)的典型酶。斑馬魚(Brachydanio rerio/Daniorerio)是世界標(biāo)準(zhǔn)化組織認(rèn)可的模式實(shí)驗(yàn)動(dòng)物之一，它不像哺乳動(dòng)物，其CYP1A未分化為cypla1和cypla2兩種亞型，而只有一個(gè)cypla基因。本研究以DLCs中的典型代表2，3，7，8-四氯二苯并二噁英(2，3，7，8-Te

3、trachlorodibenzo-p-dioxin，TCDD)及3-甲基膽蒽(3-Methylcholanthrene，3-MC)分別對(duì)斑馬魚進(jìn)行水浴染毒，觀察3-MC對(duì)斑馬魚組織病理學(xué)的變化并找出作用的靶器官，并利用生物學(xué)方法探討這兩種DLCs分別暴露對(duì)斑馬魚EROD酶活性及cypla mRNA的誘導(dǎo)作用，以期在分子水平篩選出合適的生物標(biāo)志物，為檢測飼料、水體、食品中DLCs的污染奠定基礎(chǔ)。研究獲得以下結(jié)果： 1.病理組織學(xué)檢

4、查發(fā)現(xiàn)，經(jīng)3-MC水浴暴露后，斑馬魚肝細(xì)胞變性，壞死、溶解，造成機(jī)體內(nèi)物質(zhì)代謝障礙；斑馬魚鰓小片表面粗糙，上皮細(xì)胞不完整，引發(fā)呼吸障礙：斑馬魚心肌細(xì)胞萎縮壞死；斑馬魚腸道上皮細(xì)胞壞死，微絨毛減少以及腎小管上皮細(xì)胞腫脹，細(xì)胞界限不清，管腔內(nèi)均質(zhì)紅染。 2.經(jīng)TCDD、3-MC分別暴露，均引起斑馬魚肝、鰓EROD酶活性顯著增加。暴露48h后，與對(duì)照組相比，TCDD各暴露組斑馬魚肝、鰓EROD酶活性均極顯著增加(P<0.01)。就3-

5、MC各暴露組中斑馬魚肝EROD酶活性而言，25μg/L暴露組顯著增加(P<0.05)，其余各組極顯著增加(P<0.01)；而各暴露組斑馬魚的鰓EROD酶活性均極顯著增加(P<0.01)。EROD酶活性分別與TCDD、3-MC形成良好的濃度(劑量)-效應(yīng)關(guān)系。 3.從供試的斑馬魚肝臟中克隆獲得了cypla基因cDNA片段序列，經(jīng)序列分析比對(duì)，該序列含有cylpla的cDNA及其特征序列，和已發(fā)表的斑馬魚cypla的cDNA同源性為

6、99％，表明該基因片段是斑馬魚的cypla基因。 4.利用RT-PCR方法研究了TCDD、3-MC分別暴露，對(duì)斑馬魚cypla mRNA表達(dá)的影響。在TCDD暴露48h后，各暴露組斑馬魚的肝cypla mRNA表達(dá)量增加，與對(duì)照組相比，0.05μg/L暴露組差異不顯著(P>O.05)，其余各組差異極顯著(P<0.01)；鰓cypla mRNA表達(dá)量也增加，其中0.05μg/L的暴露組差異顯著(P<0.05)，其余各組差異極顯著(