大口黑鱸肌肉生長抑制素(MSTN)對肌肉生長作用的初步研究.pdf

1、肌肉生長抑制素(Myostatin，MSTN)是轉化生長因子β超家族的一員，是骨骼肌生長、分化的負調控因子，主要作用是抑制成肌細胞的增生與分化。深入研究MSTN基因在魚類肌肉生長發(fā)育過程中的作用機制，探索該基因在大口黑鱸養(yǎng)殖生產中的潛在應用價值，不但是魚類肌肉生長分子調控機理中的重要內容，也將為魚類的肉質品質改良研究提供理論依據。為了了解MSTN對大口黑鱸仔魚生長的影響，本實驗將大口黑鱸(Micropterus salmoides)MS

2、TN成熟肽cDNA改造后克隆到pET32a(+)載體上，構建原核表達質粒，在大腸桿菌BL21中進行表達。SDS-PAGE檢測表明表達的重組蛋白分子大小約28 kDa，含量為菌體總蛋白的34％。用純化后的蛋白免疫新西蘭兔，制備抗大口黑鱸MSTN的多克隆抗體，Western blot和ELISA檢測證實所獲得的抗體可與抗原蛋白特異性結合，抗體的效價為1:62500。將獲得的抗體顯微注射到大口黑鱸受精卵的卵黃區(qū)，以觀察MSTN失活后對魚對生長

3、造成的影響，結果顯示實驗組的仔魚生長比對照組加快。此外，進行了肌肉中過量表達MSTN的研究。將大口黑鱸MSTN前肽基因定向克隆到pcDNA3.1(-)/mycHisB質粒，構建真核重組表達載體pcDNA3.1(-)/myc HisB-proMSTN。經肌肉注射法將重組表達載體注入大口黑鱸背部肌肉，RT-PCR和免疫組化學確認MSTN前肽基因已在肌肉組織中局部轉錄和表達。本研究探討了在魚類肌肉中過量表達MSTN抗體和MSTN前肽對魚類肌肉