大口黑鱸MyoD、MSTN基因單核苷酸多態(tài)性研究及與生長相關(guān)分析.pdf

1、本研究以大口黑鱸為研究對(duì)象，旨在通過對(duì)大口黑鱸MyoD基因和MSTN基因單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)研究及其與生長相關(guān)分析，為大口黑鱸輔助育種提供分子標(biāo)記位點(diǎn)。 本研究采用RT-PCR和RACE方法獲得大口黑鱸MyoD基因的cDNA序列全長1157bp，其中3’非編碼區(qū)314bp，開放閱讀框843bp，編碼280個(gè)氨基酸。采用PCR技術(shù)和基因組步移技術(shù)從大口黑鱸基因組DNA中擴(kuò)增得到MyoD基因及其5’調(diào)控區(qū)序列。該基因序列全長3797b

2、p，其中5’調(diào)控區(qū)長1077bp，MyoD基因轉(zhuǎn)錄區(qū)由3個(gè)外顯子(分別為591bp、81bp和78bp)和2個(gè)內(nèi)含子(分別為1077bp和486bp)組成。并分別對(duì)MyoD基因的cDNA和基因組序列進(jìn)行了分析。 利用PCR-SSCP技術(shù)和直接測序法分別對(duì)大口黑鱸MyoD基因和MSTN基因進(jìn)行SNP位點(diǎn)篩選，結(jié)果表明MyoD基因序列中存在7個(gè)突變點(diǎn)，均位于內(nèi)含子上；MSTN基因序列啟動(dòng)子和第一外顯子分別獲得1個(gè)突變點(diǎn)。用獲得的9個(gè)

3、SNPs位點(diǎn)對(duì)大口黑鱸養(yǎng)殖群體進(jìn)行突變比例分析，突變范圍在0.042～0.496之間。最后利用限制性內(nèi)切酶Tag I和Alu I分別對(duì)啟動(dòng)子和外顯子突變點(diǎn)進(jìn)行PCR-RFLP多態(tài)性檢測，MSTN基因啟動(dòng)子和第一外顯子突變位點(diǎn)酶切后都產(chǎn)生三種基因型和兩種等位基因。其中啟動(dòng)子突變點(diǎn)三種基因型之間的多重比較結(jié)果表明：基因型AA在大口黑鱸的平均體重、全長、體長等方面都比基因型BB要高，其中基因型AA平均體重比基因型BB的高10.5％，這說明基因