大口黑鱸MyoD、MSTN基因單核苷酸多態(tài)性研究及與生長相關(guān)分析.pdf

1、本研究以大口黑鱸為研究對象，旨在通過對大口黑鱸MyoD基因和MSTN基因單核苷酸多態(tài)性位點研究及其與生長相關(guān)分析，為大口黑鱸輔助育種提供分子標記位點。 本研究采用RT-PCR和RACE方法獲得大口黑鱸MyoD基因的cDNA序列全長1157bp，其中3’非編碼區(qū)314bp，開放閱讀框843bp，編碼280個氨基酸。采用PCR技術(shù)和基因組步移技術(shù)從大口黑鱸基因組DNA中擴增得到MyoD基因及其5’調(diào)控區(qū)序列。該基因序列全長3797b

2、p，其中5’調(diào)控區(qū)長1077bp，MyoD基因轉(zhuǎn)錄區(qū)由3個外顯子(分別為591bp、81bp和78bp)和2個內(nèi)含子(分別為1077bp和486bp)組成。并分別對MyoD基因的cDNA和基因組序列進行了分析。 利用PCR-SSCP技術(shù)和直接測序法分別對大口黑鱸MyoD基因和MSTN基因進行SNP位點篩選，結(jié)果表明MyoD基因序列中存在7個突變點，均位于內(nèi)含子上；MSTN基因序列啟動子和第一外顯子分別獲得1個突變點。用獲得的9個

3、SNPs位點對大口黑鱸養(yǎng)殖群體進行突變比例分析，突變范圍在0.042～0.496之間。最后利用限制性內(nèi)切酶Tag I和Alu I分別對啟動子和外顯子突變點進行PCR-RFLP多態(tài)性檢測，MSTN基因啟動子和第一外顯子突變位點酶切后都產(chǎn)生三種基因型和兩種等位基因。其中啟動子突變點三種基因型之間的多重比較結(jié)果表明：基因型AA在大口黑鱸的平均體重、全長、體長等方面都比基因型BB要高，其中基因型AA平均體重比基因型BB的高10.5％，這說明基因