綿羊MSTN雙價(jià)納米抗體的制備及促肌肉生長(zhǎng)功能研究.pdf

1、綿羊肌肉生長(zhǎng)抑制素（MSTN)能夠負(fù)向調(diào)控肌肉生長(zhǎng)，通過(guò)MSTN抗體阻斷其功能能夠促進(jìn)肌肉生長(zhǎng)。本研究利用已構(gòu)建綿羊MSTN納米抗體文庫(kù)，通過(guò)噬菌體展示技術(shù)淘選和篩選MSTN納米抗體基因，構(gòu)建綿羊MSTN雙價(jià)納米抗體，通過(guò)小鼠和綿羊?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證其對(duì)肌肉促生長(zhǎng)作用和功能，為進(jìn)一步研發(fā)動(dòng)物促進(jìn)肌肉生長(zhǎng)生物制劑奠定基礎(chǔ)。具體結(jié)果總結(jié)如下:
　　1、噬菌體文庫(kù)的淘選：對(duì)MSTN抗原蛋白進(jìn)行原核表達(dá)和純化，利用ELISA原理淘選已構(gòu)建納米抗體文

2、庫(kù)，獲得1個(gè)納米抗體編碼基因，經(jīng)測(cè)序表明與前期篩選結(jié)果一致。
　　2、雙價(jià)綿羊MSTN納米抗體的表達(dá)與純化：將已獲得的綿羊MSTN納米抗體編碼基因通過(guò)接頭連接為雙價(jià)納米抗體基因片段，構(gòu)建重組原核表達(dá)載體在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)并純化，通過(guò)SDS-PAGE和Western Blot驗(yàn)證表達(dá)蛋白反應(yīng)原性。大量表達(dá)和純化綿羊MSTN單價(jià)納米抗體與雙價(jià)納米抗體蛋白用于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
　　3、綿羊MSTN納米抗體小鼠促肌肉生長(zhǎng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：挑選體

3、重均勻的昆明小鼠公鼠隨機(jī)分組，每組5只，將PBS、BSA蛋白、MSTN蛋白、綿羊MSTN單價(jià)納米抗體、綿羊MSTN雙價(jià)納米抗體分別注射小鼠右后肢腿部肌肉，PBS為對(duì)照組。每隔兩天注射并稱(chēng)重記錄小鼠體重變化，取腿部長(zhǎng)收肌制作切片，觀察肌肉纖維變化情況。結(jié)果表明，納米抗體組小鼠后肢肌肉體積明顯超過(guò)對(duì)照組，納米抗體組小鼠肌肉占全身比重顯著增加，且雙價(jià)組增重效果優(yōu)于單價(jià)組。肌肉組織學(xué)觀察（10×10倍鏡下，觀察相同面積內(nèi)肌肉纖維數(shù)量）表明綿羊M

4、STN納米抗體促進(jìn)單位面積內(nèi)肌肉纖維數(shù)量增加。
　　小鼠促肌肉生長(zhǎng)進(jìn)一步驗(yàn)證：將昆明小鼠公鼠隨機(jī)分為PBS、單價(jià)納米抗體、雙價(jià)納米抗體組，每組10只。注射部位同上，結(jié)果表明，雙價(jià)納米抗體組肌肉體積與重量顯著超過(guò)單價(jià)納米抗體組。
　　4、綿羊MSTN納米抗體綿羊促肌肉生長(zhǎng)實(shí)驗(yàn)：選取3月齡綿羊9只，隨機(jī)分為PBS組、單價(jià)納米抗體組、雙價(jià)納米抗體組，每組3只，每周右后肢注射2次并稱(chēng)重，每次注射1mg。結(jié)果表明，雙價(jià)納米抗體組與單價(jià)

5、納米抗體組和PBS對(duì)照組增重效果差異不顯著。肌肉組織學(xué)觀察表明，雙價(jià)納米抗體組和單價(jià)納米抗體組肌肉纖維數(shù)量較PBS組增多，且差異顯著。
　　綜上所述，本研究成功構(gòu)建綿羊MSTN雙價(jià)納米抗體重組質(zhì)粒并在大腸桿菌中表達(dá)和純化，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明綿羊MSTN納米抗體能夠增加小鼠的體重和單位面積肌肉纖維數(shù)量，對(duì)綿羊單位面積肌肉纖維數(shù)量也有促進(jìn)作用，綿羊MSTN雙價(jià)納米抗體促進(jìn)肌肉生長(zhǎng)效果優(yōu)于單價(jià)納米抗體，雙價(jià)綿羊MSTN納米抗體的制備為研發(fā)動(dòng)物