酶的組成及儲(chǔ)存條件對(duì)模擬鴨腸液消化能力的影響.pdf

1、本試驗(yàn)旨在研究模擬鴨腸液制備中主要消化酶的來(lái)源與組合(酶的組成)及酶的儲(chǔ)存溫度與時(shí)間(儲(chǔ)存條件)對(duì)模擬腸液消化能力的影響，為模擬鴨腸液的制備提供參考。主要從以下三個(gè)方面開(kāi)展工作：1)在鴨腸道套管技術(shù)可大量獲得鴨體內(nèi)腸液的基礎(chǔ)上，建立初提純鴨腸液消化酶的方法，制備鴨腸液酶粉劑；2)模擬鴨腸液中鴨腸液酶粉劑的來(lái)源與活性貢獻(xiàn)對(duì)飼料原料消化能力的影響；3)基于鴨腸液酶粉劑制備的模擬消化液試劑盒有效水解能力的適宜存儲(chǔ)條件與時(shí)間。
　　 試

2、驗(yàn)一旨在獲得初提純鴨腸液消化酶的方法，從而為仿生消化中模擬鴨腸液的制備提供粗提純的內(nèi)源消化酶。采用兩樣本完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，分別采用硫酸銨沉淀法和低溫濃縮法將鴨腸液進(jìn)行濃縮處理后，采用低溫透析和進(jìn)一步冷凍干燥的方法制備成鴨腸液酶粉劑，比較兩種方法制備的鴨腸液酶粉劑中主要消化酶活性及回收率、真蛋白含量及回收率上的差異，并探討經(jīng)過(guò)乙醇脫脂、凍干后能否進(jìn)一步對(duì)酶粉劑進(jìn)行純化。結(jié)果表明：1)低溫濃縮-透析-凍干法與硫酸銨沉淀-透析-凍干法提取鴨腸液酶

3、粉劑的消化酶活性的回收率分別在67.02%～88.21%與53.27%～65.26%間。低溫濃縮-透析-凍干法提取鴨腸液酶粉劑消化酶的比活性比硫酸銨沉淀-透析-凍干法平均高24.92%。2)脫脂處理能進(jìn)一步提高兩種方法提取的酶粉劑中消化酶的比活性(低溫濃縮-透析-凍干法提取的粉劑提高1.1倍以上，硫酸銨沉淀-透析-凍干法提取的粉劑提高1.15倍以上)，而且，低溫濃縮-透析-凍干-脫脂法較硫酸銨沉淀-透析-凍干-脫脂法提取鴨腸液酶粉劑的消

4、化酶活性回收率高、穩(wěn)定性及純化效果好。
　　 試驗(yàn)二旨在研究模擬鴨腸液中鴨腸液酶粉劑的批次來(lái)源與活性貢獻(xiàn)對(duì)玉米、大豆粕、小麥麩消化能力的影響，為模擬鴨腸液中鴨腸液酶粉劑的適宜添加量提供參考。采用嵌套設(shè)計(jì)，其中獨(dú)立變量為鴨腸液酶粉劑的批次來(lái)源，設(shè)3個(gè)處理水平，分別為鴨腸液酶粉劑批次1、2、3；嵌套變量為模擬鴨腸液中鴨腸液酶粉劑提供的消化酶活性比例(以胰蛋白酶為基礎(chǔ))，設(shè)4個(gè)處理水平，即0%(共用)、25%、50%、75%，分別測(cè)定

5、10種模擬鴨腸液對(duì)玉米、大豆粕、小麥麩3種飼料原料的干物質(zhì)消化率和酶水解物能值。結(jié)果表明：1)3個(gè)批次的鴨腸液酶粉劑制備的模擬鴨腸液對(duì)玉米、小麥麩的干物質(zhì)表觀消化率、真消化率及酶水解物表觀能值、真能值均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；對(duì)大豆粕的干物質(zhì)表觀消化率及酶水解物表觀能值、真能值無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但對(duì)其干物質(zhì)真消化率(在71.75%～72.24%間)有顯著性差異(P<0.05)。2)同一鴨腸液酶粉劑批次內(nèi)，酶粉劑提供的消

6、化酶活性的比例從25%增加到75%時(shí)，玉米、大豆粕、小麥麩的干物質(zhì)表觀消化率和酶水解物表觀能值均顯著降低(P<0.05)，但干物質(zhì)真消化率相對(duì)穩(wěn)定(最大絕對(duì)差值0.88%，相對(duì)差值0.88%)，酶水解物真能值在鴨腸液酶粉劑提供的消化酶活性的比例從25%增加到50%的范圍內(nèi)也相對(duì)穩(wěn)定(最大絕對(duì)差值0.17 MJ/kg，相對(duì)差值0.90%)。綜合上述結(jié)果，不同批次來(lái)源的鴨腸液酶粉劑制備的模擬鴨腸液在消化能力上是相等的，模擬鴨腸液中鴨腸液酶粉

7、劑對(duì)消化酶總活性的貢獻(xiàn)在25%～50%間消化能力比較穩(wěn)定。
　　 試驗(yàn)三旨在研究消化酶粉劑的儲(chǔ)存溫度和時(shí)間對(duì)模擬鴨腸液消化能力的影響，探討鴨模擬消化液在不同儲(chǔ)存條件下消化能力的差異，為模擬鴨消化液試劑盒的儲(chǔ)存條件提供技術(shù)規(guī)范。采用2×6(2種儲(chǔ)存溫度，6種儲(chǔ)存時(shí)間)兩因素完全隨機(jī)設(shè)計(jì)，其中儲(chǔ)存溫度設(shè)2個(gè)處理水平，即4℃、常溫；儲(chǔ)存時(shí)間設(shè)6個(gè)處理，即0、1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月、4個(gè)月、5個(gè)月。分別測(cè)定不同儲(chǔ)存溫度和時(shí)間下模擬鴨腸液

8、中胰蛋白酶、糜蛋白酶及淀粉酶3種主要消化酶活性及其對(duì)玉米、大豆粕、小麥麩3種飼料原料的干物質(zhì)消化率和酶水解物能值。結(jié)果表明：1)儲(chǔ)存溫度和儲(chǔ)存時(shí)間對(duì)模擬鴨腸液中胰蛋白酶、糜蛋白酶及淀粉酶的活性有顯著性影響(P<0.05)，4℃條件下儲(chǔ)存的模擬鴨腸液的酶活性顯著地高于常溫下儲(chǔ)存的模擬鴨腸液的酶活性(P<0.05)，隨著儲(chǔ)存時(shí)間的延長(zhǎng)，模擬鴨腸液中主要消化酶活性呈下降。2)儲(chǔ)存溫度和時(shí)間對(duì)模擬鴨腸液對(duì)玉米、大豆粕、小麥麩的干物質(zhì)消化率和酶水

9、解物能值均有一定程度的影響，但其干物質(zhì)真消化率和酶水解物真能值保持相對(duì)穩(wěn)定。3)4℃儲(chǔ)存條件下，不同儲(chǔ)存時(shí)間的模擬鴨腸液對(duì)玉米、大豆粕和小麥麩的干物質(zhì)表觀消化率和酶水解物表觀能值有差異，但對(duì)其干物質(zhì)真消化率(最大絕對(duì)差值0.87%，相對(duì)差值0.51%)和酶水解物真能值(最大絕對(duì)差值0.19MJ/kg，相對(duì)差值0.62%)保持相對(duì)穩(wěn)定；常溫儲(chǔ)存條件下，不同儲(chǔ)存時(shí)間的模擬鴨腸液對(duì)玉米、大豆粕和小麥麩的干物質(zhì)表觀消化率和酶水解物表觀能值有差異