肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良CyclinI，Matrilin3基因的免疫組化與原位雜交研究.pdf

1、肉雞脛骨軟骨發(fā)育不良（Tibial Dyschondroplasia，TD）是肉雞常見的腿病之一，以脛骨軟骨內(nèi)骨化受阻和脛骨干骺端的軟骨細胞增生形成無血管的玉白色的“軟骨楔”為特征。TD的發(fā)生與品種、營養(yǎng)、環(huán)境、管理等因素有關。TD對養(yǎng)雞業(yè)造成重大經(jīng)濟損失，近年來對TD的研究逐漸深入，但其發(fā)病機理仍有待于進一步探明。
　　 CyclinⅠ，細胞周期調(diào)節(jié)因子Ⅰ，屬于細胞周期調(diào)節(jié)蛋白（Cyclin）家族，在細胞的分裂與增殖過程中起著

2、重要作用，能調(diào)控細胞周期、促進細胞生長、細胞粘附、細胞遷移、誘導細胞凋亡，調(diào)控腫瘤生長、血管發(fā)生和軟骨內(nèi)骨化；Matrilin3，是一族非膠原性細胞外基質(zhì)蛋白家族一員，主要參與胞外基質(zhì)纖維的形成，并可與膠原或非膠原蛋白相連接，調(diào)節(jié)膠原纖維與其它基質(zhì)如蛋白聚糖之間的相互作用，其表達異?？蓪е鹿趋堪l(fā)育不良，骨關節(jié)炎等疾病。目前對于二者在肉雞TD發(fā)生發(fā)展中的表達變化研究還較少。
　　 在本課題研究小組前期的研究中，應用抑制消減雜交（S

3、SH）技術及基因芯片技術篩選出肉雞TD差異表達基因，其中就包括CyclinI和Matrilin3。為探求二者在肉雞TD不同階段的差異表達情況，本實驗采用免疫組化和原位雜交方法分別從蛋白和基因水平對肉雞TD發(fā)生中CyclinI和Matrilin3基因差異表達的時序性進行研究，取得的結果如下：
　　 經(jīng)動物實驗，利用福美雙成功誘發(fā)肉雞TD，分四次采樣，取脛骨軟骨生長板，制作組織石蠟切片，提取RNA，構建了pGEM-T-CyclinI

4、、pGEM-T-Matrilin3克隆載體，提取質(zhì)粒分別酶切，標記DIG-cRNA探針，進行原位雜交。CyclinI原位雜交結果顯示，與對照組相比，在肉雞TD中CyclinI在不同時期都出現(xiàn)上調(diào)和下調(diào)的現(xiàn)象：第1、3、4次采樣下調(diào)表達，第2次采樣上調(diào)表達。
　　 Matrilin3原位雜交結果顯示，TD組Matrilin3在不同時期也出現(xiàn)上調(diào)和下調(diào)表達，與對照組比較，第1、2次采樣TD組下調(diào)表達，而第3、4次上調(diào)表達。