黃鱔(Monopterus albus)foxl2 cDNA克隆、表達(dá)及功能初步分析.pdf

1、FOXL2(forkhead box L2)是一種具有翼螺旋/頭叉DNA結(jié)合域的轉(zhuǎn)錄因子，在眼瞼及成體卵巢顆粒細(xì)胞中表達(dá)。FOXL2參與脊椎動(dòng)物雌性性腺早期發(fā)育與分化，對(duì)卵巢發(fā)育和維持卵巢功能具有重要作用，被認(rèn)為是卵巢發(fā)育途徑的決定因子，能抑制性腺向雄性途徑的分化。
　　 本文利用RT-PCR結(jié)合RACE，從黃鱔(Monopterus albus)性腺cDNA文庫(kù)中克隆了foxl2的全長(zhǎng)cDNA序列。黃鱔foxl2 cDNA長(zhǎng)2

2、004bp，編碼一個(gè)306個(gè)氨基酸的蛋白；氨基酸序列分析表明它的forkhead doamin與其它各物種具有高度相似性，且C-末端保守性也很高；進(jìn)化樹分析顯示，黃鱔FOXL2與其他魚類的FOXL2蛋白處于同一分支，與蜂巢石斑魚(Epinephelus merra)的FOXL2同源性高達(dá)98％；基因組Walking克隆到黃鱔foxl25'上游長(zhǎng)約3kb的序列，啟動(dòng)子序列分析發(fā)現(xiàn)存在兩個(gè)潛在的1/2ERE位點(diǎn)，可能介導(dǎo)對(duì)雌激素的反應(yīng)性。<

3、br>　　 使用RT-PCR檢測(cè)了foxl2在雌性和雄性黃鱔不同組織中的表達(dá)情況。foxl2主要在性腺中高表達(dá)，且卵巢的表達(dá)量遠(yuǎn)高于精巢，在雌性和雄性的各個(gè)腦區(qū)也有不同程度的表達(dá)，在垂體中的表達(dá)較高，這提示黃鱔foxl2主要在腦-垂體-性腺軸起作用。
　　 用熒光定量RT-PCR的方法檢測(cè)了性腺中foxl2在發(fā)育過程中的表達(dá)水平。在雌性發(fā)育周期的卵巢中，foxl2在卵黃發(fā)生前期(GSI＜1)的表達(dá)水平最低，在卵黃發(fā)生早期(1＜

4、GSI＜2)上升，并且在卵母細(xì)胞成熟期(GSI＞5)表達(dá)量達(dá)到最高，這就提示著foxl2在卵巢發(fā)育中起著重要的作用。在黃鱔天然性逆轉(zhuǎn)過程中，卵巢中foxl2高表達(dá)，間性早期和中期顯著下調(diào)，間性后期表達(dá)量降到最低，這提示foxl2表達(dá)的下降可能對(duì)調(diào)節(jié)性逆轉(zhuǎn)過程卵母細(xì)胞的凋亡起著重要作用。
　　 構(gòu)建了黃鱔foxl2的真核表達(dá)載體，將它與黃鱔FTZ-F1真核表達(dá)載體、以及cyp19a1a啟動(dòng)子載體共轉(zhuǎn)染TM4細(xì)胞，轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)表明：不論